两色金鸡菊头状花序的化学成分研究

材料

Bruker Advance -300核磁共振波谱仪（TMS作内标）；YG-20 250质谱仪；JASCO J-810型圆二色散光谱仪。高效液相色谱仪（Waters 600 泵，Waters 2487 Dual λ Absorbance Detector，Waters 2996 Photodiode Array Detector，Millennium 2010系统工作站，均为美国Waters液相色谱公司产品）。薄层色谱硅胶GF₂₅₄和柱色谱硅胶（100～200，200～300目），均为青岛海洋化工厂生产；聚酰胺薄膜（台州市路桥四甲生化塑料厂）；葡聚糖凝胶Sephedax LH-20（Amershambioscies Ltd.）；反相硅胶RP-18（Fuji Silysia Chemical Ltd.）；大孔吸附树脂D101（南开大学化工厂）。

样品采自新疆和田地区墨玉县，由香港浸会大学中医药学院陈虎彪教授鉴定为两色金鸡菊C. tinctoria的干燥头状花序，药材标本存放于北京大学中医药现代研究中心标本室（No. CT-XJ-0408）。

2 提取和分离

两色金鸡菊干燥花序5.0 kg，用二氯甲烷-甲醇（1∶1）混合溶剂超声除去中、低极性成分，剩余残渣用70%甲醇提取3次，溶剂量分别为50，40，30 L，提取时间依次为1，0.5，0.5 h，合并提取液并浓缩。将浓缩物分布于水中，依次用乙酸乙酯、正丁醇萃取，得到乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物。将乙酸乙酯萃取物再混悬于水中，用二氯甲烷反萃取，得到二氯甲烷萃取物（45 g）和水层。将正丁醇萃取物混悬于水中，用乙酸乙酯反萃取，得到乙酸乙酯萃取物和水层。合并正丁醇部分的乙酸乙酯萃取物和乙酸乙酯部分的水层，即为乙酸乙酯萃取物（90 g）。正丁醇部分经乙酸乙酯反萃取后的水层浓缩即为正丁醇提取物（168 g）。

取乙酸乙酯萃取物90 g，硅胶柱色谱分离，二氯甲烷-甲醇（100∶1）洗脱得到Fr.A；Fr.A经减压硅胶柱色谱分离，二氯甲烷-甲醇-水梯度洗脱（15∶1∶0.01～2∶1∶0.01）得到Fr.A-a～Fr.A-c。Fr.A-a经硅胶柱色谱进一步分离，石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱（20∶1～10∶1 ）得到Fr.A-a-1，经氯仿重结晶得到无色针状结晶8（29.8 mg）。Fr.A-b采用减压硅胶柱色谱进行分离，氯仿-甲醇-水（20∶1∶0.05）洗脱得到Fr.A-b-1，以Sephadex LH-20柱色谱继续分离，90%甲醇洗脱得到Fr.A-b-1-1和Fr.A-b-1-2；经高效液相柱色谱进一步分离，色谱柱为Prep Nova-Pak^RHP C₁₈，检测器为Waters 2487 Dual λAbsorbance Detector，流动相为甲醇-0.05%三氟乙酸溶液（2∶8），Fr.A-b-1-1 得到黄色无定形粉末1（9.3 mg），2（2.0 mg），3（3.2 mg）；Fr.A-b-1-2得到类黄色无定形粉末5（3.3 mg），6（8.0 mg）。Fr.A-c经减压硅胶柱色谱反复分离，二氯甲烷-甲醇梯度洗脱（15∶1～9∶1 ）得到Fr.A-c-1，经甲醇重结晶得到无色针状结晶7（30.3 mg）。

取正丁醇萃取物148 g，D101大孔吸附树脂柱色谱分离，甲醇-水梯度洗脱，70%乙醇洗脱部分为Fr.Ⅰ；Fr.Ⅰ采用Sephedax LH-20柱色谱分离，50%甲醇洗脱得到Fr.Ⅰ-1；Fr.Ⅰ-1以ODS柱色谱进一步分离，50%甲醇洗脱得到Fr.Ⅰ-1-1；Fr.Ⅰ-1-1以高效液相柱色谱进行分离，色谱柱为Prep Nova-Pak^RHP C₁₈，检测器为Waters 2487 Dual λ Absorbance Detector，流动相为甲醇-0.05%三氟乙酸溶液（9∶16）， 得到黄色无定形粉末4（6.7 mg）。

3 结构鉴定

化合物1 类黄色无定形粉末，溶于甲醇，mp 197～200 ℃。EI-MS m/z 154 （M^+·）。¹H，¹³C-NMR 数据见表1。其数据与文献[11]报道的3，4-二羟基苯甲酸数据基本一致。

化合物2 类黄色无定型粉末，溶于甲醇，mp 213～215 ℃。 ESI-MS m/z 137 [M-H]^-。¹H，¹³C-NMR 数据见表1。其数据与文献[12]报道的4-羟基苯甲酸数据基本一致。

化合物3 类黄色无定型粉末，溶于甲醇，mp 202～204 ℃。 ESI-MS m/z 179 [M-H]^-。¹H-NMR（CD₃OD，300 MHz） δ：7.33（1H，d，J=15.9 Hz，Hβ），6.99（1H，s，H-2），6.91（1H，d，J=8.4 Hz，H-6），6.73（1H，d，J=8.4 Hz，H-5），6.15（1H，d，J=15.9 Hz，H-α）；¹³C-NMR（CD₃OD，75 MHz） δ：168.5（C=O），148.0（C-4），145.7（C-3，β），126.0（C-1），120.8（C-6），115.8（C-5，α），114.5（C-2）。以上数据与文献[13]报道的咖啡酸数据一致。

化合物4 类黄色无定形粉末，溶于甲醇，mp 187～189 ℃。EI-MS m/z 341 （M^+·）。 ¹H-NMR（DMSO-d₆，500 MHz） δ：7.59（1H，d，J=16.0 Hz，H-β），7.50（2H，d，J=8.5 Hz，H-2，6），7.06（2H，d，J=8.5 Hz，H-3，5），6.35（1H，d，J=16.0 Hz，H-α），4.91（1H，d，J=7.5 Hz，H-1′），3.84（1H，d，J=12 Hz，H-6′），3.71（3H，s，-OCH₃），3.64（1H，d，J=12 Hz，H-6′）；¹³C-NMR（DMSO-d₆，125 MHz）δ：169.4（C=O），160.9（C-4），145.8（C-β），130.8（C-2，6），129.8（C-1），117.0（C-3，5），116.7（C-α），101.9（C-1′），78.3（C-5′），78.0（C-3′），74.9（C-2′），71.3（C-4′），62.5（C-6′），52.1（-OCH₃）。以上数据与文献[14]报道的对羟基桂皮酸甲酯葡萄糖苷（4-O-β-D-glucopyranosyl-p-coumaric acid methyl ester）数据基本一致。

化合物5 类黄色无定形粉末，溶于甲醇，mp 223～225 ℃。 EI-MS m/z 272 （M^+·）。 ¹H，¹³C-NMR 数据见表2。CD 323，290 nm波长处分别出现正、负Cotton效应，因此Ⅴ为2S构型。其数据与文献[15]报道的2S-3′，5′，7-三羟基二氢黄酮（2S-3′，5′，7-trihydroxyflavanone）数据一致。

化合物6 类黄色无定形粉末，溶于甲醇，mp 229～231 ℃。EI-MS m/z 288（M^+·）。¹H，¹³C-NMR 数据见表2。CD 323，292 nm波长处分别出现正、负Cotton效应，因此Ⅵ为2R，3R构型。以上数据与文献[16]报道的（2R，3R）-3，4′，5，7-四羟基二氢黄酮[（2R，3R）-3，4′，5，7-tretahydroxyflavanone]数据基本一致。

化合物7 无色针状针晶，溶于甲醇，mp 167～169 ℃。¹³C-NMR（C₅D₅N，75 MHz）δ：149.2（C-5），138.9（C-22），129.5（C-23），121.9（C-6），102.6（C-1′），78.6（C-5′），78.5（C-3′），78.1（C-3），75.4（C-2′），71.7（C-4′），62.8（C-6′），56.8（C-14），56.2（C-17），50.3（C-9），46（C-24），40.8（C-13），39.9（C-12）， 39.4（C-1），37.5（C-4），36.9（C-10），36.4（C-20），32.2（C-2），32.1（C-25），30.3（C-8），29.5（C-7），29.3（C-16），25.7（C-15），24.5（C-28），21.3（C-11），20.0（C-26），19.4（C-19），19.2（C-21），19.0（C-27），12.2（C-18），12.0（C-29）。以上数据与文献[17]报道豆甾醇葡萄糖苷数据一致。

化合物8 无色针状结晶，溶于氯仿，mp 139～141 ℃，Liebermann-Burchurd反应阳性，10%硫酸乙醇溶液显色为紫红色。TLC行为与β-谷甾醇对照品一致，混合熔点不下降。

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Chemical constituents of Coreopsis tinctoria

ZHANG Yuan ， TU Peng-fei

（1. State Key Laboratory of Natural and Biomimetic Drugs， School of Pharmaceutical Sciences，Peking University Health Science Center， Beijing 100083， China；

2. School of Chinese Pharmacy， Beijing University of Chinese Medicine， Beijing 100102， China）

[Abstract] Objective： To study the chemical constituents of the inflorescences of Coreopsis tinctoria and provide the chemical basis for development and utilization of this plant. Method： Various chromatographic techniques were employed for the isolation and purification of the constituents including silica gel，Sephadex LH-20 and pre-HPLC. The structures of compounds were elucidated by chemical and spectral analysis（NMR，IR，UV and MS）. Result： Eight compounds have been isolated from the inflorescences of C. tinctoria ， including three organic acids which are 3，4-dihydroxybenzoicacid（1），4-hydroxybenzoicacid（2） and caffeic acid（3），one organic ester which is 4-O-β-D-glucopyranosyl-p-coumaric acid methyl ester（4），two flavonones which are 2S-3′，5′，7-trihydroxyflavanone（5） and（2R，3R）-3，4′，5，7-tetrahydroxylflavanone（6），two sterols which are stigmasterol-3-O-β-D-glucopyranoside（7）and β-sitosterol（8）. Conclusion： Compounds 1-7 were isolated from genus Coreopsis for the first time and compound 8 was isolated first from C. tinctoria.

[Key words] Coreopsis tinctoria； inflorescences； chemical constituents； organic acids； flavanones

doi：10.4268/cjcmm20122316

[责任编辑 孔晶晶]

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