材料
祛黄褐斑丸（自制，批号：140101、140402、140403）;淫羊藿对照药材（120831-201308）、黄芩对照药材（121073-201011）、当归对照药材（121023-201308）、白芍对照药材（121165-201204）均购自广东天泰药业有限公司;硅胶G（140909）由青岛海洋化工有限公司提供;水合氯醛、甲醇、三氯化铁、甲酸、三氯甲烷、乙醇、乙醚、乙酸乙酯、石油醚、石油醚、浓氨试液、浓硫酸、甘油均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 祛黄褐斑丸显微鉴定方法
2.1.1 黄芪的显微鉴定
取祛黄褐斑丸（批号：140401）粉碎过100目筛，取少量粉末，加水合氯醛透化2次，稀甘油装片，置显微镜下观察：纤维成束或散离，壁厚，表面有纵裂纹，两端断裂成帚形或较平截（黄芪）（见图1）。
2.1.2 巴戟天的显微鉴定
取祛黄褐斑丸（批号：140401）粉碎过100目筛，取少量粉末，加水合氯醛透化2次，稀甘油装片，置显微镜下观察：石细胞类圆形、类方形、类长方形、长条形或不规则形，有的一端尖，层纹、纹孔和孔沟明显，有的石细胞形大，壁稍厚（巴戟天）（见图2）。
2.1.3 当归的显微鉴定
取祛黄褐斑丸（批号：140401）粉碎过100目筛，取少量粉末，加水合氯醛透化2次，稀甘油装片，置显微镜下观察：薄壁细胞纺锤形，壁稍厚，有极微细的斜向交错纹理（当归）（见图3、图4）。
2.2 祛黄褐斑丸的薄层色谱鉴别方法
2.2.1 淫羊藿的薄层鉴别
（1）样品制备。
取本品粉末5g，加乙醇20mL，超声处理15min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1mL使溶解，作为供试品溶液。取淫羊藿对照药材粉末1g，同法制成对照药材溶液。同供试品溶液制成阴性对照溶液。
（2）色谱条件。
①层析材料以0.5%羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板。
②点样量供试品溶液、阴性对照溶液各2μL及对照药材溶液各2μL。
③展开剂以石油醚-乙酸乙酯（4∶1）为展开剂，展开，取出，晾干。
④展开方式向上展开。
⑤显色置于水平桌面，365nm紫外光灯观察至斑点颜色清晰。
（3）实验结果。
按拟定的方法进行试验，结果：淫羊藿阴性对照色谱中，在与供试品色谱和淫羊藿对照药材色谱相应的位置上，不显相同颜色的荧光斑点，表明淫羊藿阴性样品无干扰（见图5）。
2.2.2 黄芩的薄层鉴别
（1）样品制备。
供试品溶液的制备：取本品粉末5g，加乙醇100mL，超声处理30min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1mL使溶解，作为供试品溶液。取黄芩对照药材粉末1g，加乙醇20mL，超声处理30min，滤过，同法制成对照药材溶液。同对照药材法制成阴性对照溶液。
（2）色谱条件。
①层析材料：含4%乙酸钠的羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板。
②点样量：供试品溶液2μL、对照药材溶液与阴性对照溶液各5μL。
③展开剂：以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水（5∶3∶1∶1）为展开剂。
④展开方式：向上展开。
⑤显色：分别置日光下检视。
（3）实验结果。
按拟定的方法进行试验，结果：黄芩对照药材色谱在与供试品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性样品无干扰，表明方法可行（见图6）。
3 结论
该实验证明祛黄褐斑丸中黄芪、巴戟天、当归具有显微鉴别特征，可用于该品的显微鉴定。对该品中淫羊藿、黄芩二味药的薄层鉴别，其斑点清晰，展开效果好。可作为祛黄褐斑丸质量控制方法之一，为祛黄褐斑丸的质量控制和开发提供参考依据。
4 讨论
该实验采用TLC法对祛黄褐斑丸中淫羊藿、黄芩、川芎等药材进行了鉴别。在鉴别过程会出现薄层色谱实验常出现的问题，如：（1）边缘效应;（2）斑点不清晰或斑点颜色颜色较浅;（3）拖尾现象;（4）与其他干扰斑点分离不开，斑点Rf值过大或过小等。所以解决的方法有：（1）点样量适宜，原点直径应不大于3mm，若点条状带，则其“高度”应控制在1mm左右，或在原有展开剂比例的基础上加适量酸或碱。（2）喷显色剂使斑点清晰或浓缩供试品溶液，使其浓度增加。如白芍的主要有效成分为芍药苷，可选5%香草醛硫酸溶液作为其显色剂。（3）适当调整展开剂的极性，以将目标斑点与干扰斑点分离得更完全和使斑点的 Rf值控制在0.2～0.8范围内。（4）展开剂应现配现用，应当在配好后，强烈振摇，静置，以使展开剂的各组分充分混匀。预饱和时间应为20min以上，部分药物需要长时间预饱和，如淫羊藿，其预饱和时间应为30min左右。展开缸的密闭性应良好。此次实验也对川芎药材进行了薄层色谱鉴别，但由于有阴性干扰，故不列入此次研究内容。
该实验显微鉴别特征明显，可用于方中药材的鉴定。TLC中各种成分的阴性对照均无干扰，方法专属性强，简单操作，准确度高，建议可作为该制剂的质量标准控制的内容之一。
参考文献
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