【摘要】以健康叶尔羌高原鳅为试验材料，在不同pH条件下，分别测定叶尔羌高原鳅肝胰脏、前肠、中肠、后肠中蛋白酶、淀粉酶活性的变化以及在不同消化部位中这些消化酶的活性大小变化规律。实验结果表明，随pH值的升高蛋白酶、淀粉酶的活性变化均表现为先增加后降低。肝胰脏、前肠、中肠和后肠蛋白酶的最适pH分别为8.0、7.0、7.0、8.0。肝胰脏淀粉酶的最适pH在7.0左右，而前肠、中肠和后肠淀粉酶的最适pH均在6.0左右。
【关键词】叶尔羌高原鳅；主要消化酶活性；不同pH值
前言
在塔里木河水系鳅科鱼类中，叶尔羌高原鳅是一个特有种，是偏肉食底层鱼类，它个体较大、生长较快，且有很高的蛋白质含量以及种类丰富的氨基酸。设立不同pH梯度，研究pH对叶尔羌高原鳅消化道主要酶活性的影响，确定消化道不同部位主要消化酶活性的最适pH值，以期为了解叶尔羌高原鳅消化生理特点、人工驯化以及合理的配合饲料、开发添加剂等提供一些参考依据。
1、材料与方法
1.1 实验用鱼 实验所用叶尔羌高原鳅是从十团五连渠道捕捞。鱼体健康无伤，平均体长为13.5cm，平均体重为39.242g，鱼体捕回后空腹24h进行测定。
1.2 方法
1.2.1 酶粗提液制备 将空腹24小时的叶尔羌高原鳅剪头部，致其死亡，接着对其体长、体重等进行测量，然后把它放在冰盘上进行解剖。通过将叶尔羌高原鳅的肠道、肝胰脏分离，并将内含物剔除，把叶尔羌高原鳅的肠道分成前肠（肠道第一扭节之前部分）、中肠（第一、二扭节之间部分）和后肠（第二扭节后）。剪开肠道，用去离子水冲洗肠道内壁。用滤纸吸干多余水分，以20尾鱼（体长及体重接近）的同一部位合并为一个样本，置于-20℃超低温冰柜中保存。
用剪子将各肠道组织及肝胰脏组织剪碎，适量称取之后加入去离子水（10倍重量），冰水浴，4℃，12000r/min，用1.5ml离心管离心10min，最终得到的上清液就是酶粗提液。依据肝胰脏、前肠、中肠、后肠分别编号所得酶液，接着储存到4℃冰箱里，于24h内完成测定。
1.2.2 pH梯度设定 在pH3.0～10.0的范围将pH梯度差设为1.0，并设立出8个梯度。通过磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液来配制pH3.0～8.0的范围，并用甘氨酸-氢氧化钠缓冲液调节pH9.0～10.0pH。
1.2.3 酶活性测定方法
1.2.3.1 蛋白酶活性测定——福林酚试剂法
样品测定：设对照组和测定组，在对照组中加入1ml去离子水，在测定组中加入1ml酶液，在37℃恒温水浴预热3～5min，分别加入不同pH值的缓冲液配制的0.5%酪蛋白2ml，在37℃水浴准确反应15min，将3ml10%三氯乙酸分别加入来终止反应，紧接着选择一般的离心机进行10min离心，取1ml上清液，分别加入0.55 mol/L碳酸钠5ml，再加入1ml福林酚试剂，迅速混匀，在37℃水浴显色15min，冷却，用723型分光光度计于680nm波长比色，以对照组校零，读取测定组吸光值。
1.2.3.2 淀粉酶活性测定——DNS法
样品测定：取50ml刻度比色管，标明为对照组，测定组。分别加入1%淀粉溶液2ml，放入恒温水浴锅中，在37℃水浴预热5min，分别加入不同pH值缓冲液1ml，在测定组中加入1ml酶液，摇匀，对照组中不加酶液，5min后加向各比色管中加入0.4mol/L氢氧化钠4ml终止反应，取反应后溶液2ml，分别将2mlDNS试剂加入其中并混匀，接着放入沸水中煮5min，要求计时准确，然后取出，用流水冷却，再加蒸馏水定容到25ml，即刻混匀。用723型分光光度计于540nm波长测吸光值。以蒸馏水校正光密度0点，读取对照和测定组光密度读数。
测定时，每个样品平行测定3次，结果取平均值。
1.3 实验数据分析与处理
分析该实验数据时采用的是SPSS统计软件，且选择F检验事实差异显著性的对比，显著水平P=0.05。
2、结果与分析
在三种消化酶最适的pH下，对叶尔羌高原鳅肝胰脏、前肠、中肠、后肠的蛋白酶、淀粉酶活性进行比较。结果表明，前肠蛋白酶活性最高，其次是中肠、肝胰脏和后肠；肝胰脏淀粉酶活性最高，其次为中肠、前肠和后场。
3、讨论
pH值对鱼类生理活动有各种各样的影响，而pH的大小是重要的鱼类消化酶活性制约因素之一，不仅会酸碱性消化鱼类所摄入的食物，还能使消化酶获得最合适的pH值。尽管研究pH对鱼类消化酶活性的离体和鱼类体内真实的消化酶pH存在一定的偏差，但相关性依旧是存在的，可为我们了解叶尔羌高原鳅消化生理特点、人工驯化和合理投食、配合饲料及添加剂的开发等方面提供依據。
4、结论
通过实验可以知道，叶尔羌高原鳅的消化道主要酶最合适的pH通常是在6.0～8.0范围以内，接近中性，所以在饲喂叶尔羌高原鳅时应对饲料的pH进行适当的调节，这样做有利于叶尔羌高原鳅对食物的摄取和提高食物的利用率，从而促进叶尔羌高原鳅的生长发育。叶尔羌高原鳅是一种杂食性的鱼类，偏肉食性，为其制备饲料的过程中应适当多添加一些优质的蛋白质，以促使叶尔羌高原鳅的生长速度有所提高。除此以外，鱼类淀粉酶的活性比禽、猪等陆生动物要低很多，可适当在饲料里添加一些外源性的淀粉酶，从而提高淀粉的利用率，有效减少叶尔羌高原鳅排泄有机物的量。
参考文献：
[1]朱松泉.中国条鳅志[M].南京：江苏科学技术出版社，1989.
[2]倪寿文.草鱼，鲤，鲢，鳙和淀粉酶比较研究[J].大连水产学院学报，1992，7（1）：24-31.
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