摘要对黑鲷血液的血清总蛋白、白蛋白含量及血清中谷草转氨酶、谷丙转氨酶、酸性磷酸酶、碱性磷酸酶、胆碱酯酶、乳酸脱氢酶活力进行测定,结果表明:黑鲷血液血清中总蛋白含量为(61.54±2.81) g/L,白蛋白含量为(31.95±4.47) g/L,血清谷草转氨酶活力为(86.00±10.98) U/L,谷丙转氨酶活力为(42.68±5.65) U/L,酸性磷酸酶活力为(2.73±0.96) U/L,碱性磷酸酶活力为(42.38±5.31) U/L,胆碱酯酶活力为(149.38±16.31) U/L,乳酸脱氢酶活力为(196.89±15.12) U/L。
关键词黑鲷;血清;生化指标
中图分类号 S965.231 文献标识码A文章编号 1007-5739(2010)16-0307-02
StudyonSerumBiochemicalIndexesofSparusinacrocephalus
LIU Ying 1QIAO Wei-liang 2WEI Dong 3QIAO Hong-li 3XINN Xiao-wei 3
(1 Vocational Techmical College,Tianjing Agricultural University,Tianjing 300380; 2 AquaticSerrice Company in Shumyi District of Beijing;
3 Department of Fisheries Science,Tianjing Agricultural University,key Laboratory of Fisheries Ecology and Culture of Tianjing City)
AbstractThe content of total protein(TP) and albumin(Alb)of sparus inacrocephalus serum were mensuated,and its glutamic-oxalacetic transaminse(GOT),glutamic-pyruvic transaminase(GPT),acid phosphatase(ACP),alkaline phosphatase(ALP),cholinesterase(CHE),lactate dehydrogenase(LDH)were determined. The results showed that the content of TP and Alb in sparus inacrocephalus blood serum were (61.54±2.81)g/L and(31.95±4.47)g/L respectively. The activity of GOT,GPT,ACP,ALP,CHE and LDH were(86.00±10.98)U/L,(42.68±5.65)U/L,(2.73±0.96)U/L,(42.38±5.31)U/L,(149.38±16.31)U/L and(196.89±15.12)U/L respectively.
Keywordssparus inacrocephalus;serum;biochemical indexes
黑鲷(Sparus inacrocephalus)隶属于鲈形目(Perciformes)鲷科(Sparidac)鲷属(Sparus linnaeus)[1],产于北太平洋西部,我国沿海均产之,以黄、渤海产量较多,主要渔场在山东沿海。黑鲷属肉食性鱼类,为广温、广盐性品种,性成熟过程具有明显的性逆转现象。黑鲷肉质鲜美是名贵的海产鱼类之一,生长快,食性广,易饲养,抗病力强,易于保管和贮存,是海水和咸淡水增养殖的优良品种。
血液是动物体内一种极其重要的组织,与机体的代谢、营养状况及疾病有着密切的关系,血液学指标是生物重要的生化指标之一。因此,比较不同鱼类的血液学指标对了解鱼类的生态适应性有重要意义[2]。当鱼体受到外界因子的影响而发生生理或病理变化时,也必定会经血液的生化指标反映出来。因此,鱼类血液的生化指标被广泛地用来评价鱼类的健康状况、营养状况及对环境的适应状况,是重要的生化、病理和毒理学指标,可应用于鱼病诊断、环境监测及遗传育种等方面[3]。目前对鱼类血液的生理生化指标已进行一些研究。其中淡水鱼类的血液生化指标研究较多,如对白鲢、鳙鱼、草鱼、异育银鲫[4]和鲤鱼的研究较为广泛。海水鱼类血液生化指标研究涉及的却很少,只有少数的几种,如罗非鱼、斜带石斑鱼[5]等。但对黑鲷血液的生化指标的研究尚无报道。为此,对黑鲷血液的一些生化指标进行研究,以为黑鲷的养殖和疾病防治提供参考。
1材料与方法
1.1试验鱼
黑鲷分2次购自天津市红旗水产批发市场,共8尾。体长(31.83±3.20)cm,体重(564.82±148.46)g。塑料袋充氧后运回实验室,置于玻璃水缸内暂养1 d,水体为放置3 d以上的人工配制海水,盐度17,水温保持24 ℃,24 h不间断充气,期间不投喂饵料,选择健康活泼个体开始试验。
1.2仪器与试剂
1.2.1试验仪器。5 mL一次性注射器,Eppendorf移液枪,LP4-2A离心机,分光光度计,Scientific半自动生化分析仪,HH-6六孔水浴锅。
1.2.2试剂及配制。0.1 mol/L磷酸盐缓冲液、2,4二硝基苯肼溶液、0.4 mol/L氢氧化钠、丙酮酸标准液、谷丙转氨酶基质液、谷草转氨酶基质液、乳酸脱氢酶测定试剂盒、胆碱酯酶测定试剂盒、碱性磷酸酶测定试剂盒、酸性磷酸酶测定试剂盒、白蛋白测定试剂盒、总蛋白测定试剂盒,由北京中生北控生物科技股份有限公司购置。
1.3试验方法
1.3.1血清制备。试验血样是直接用5 mL注射器从鱼的尾静(动)脉抽取,每尾鱼抽取约3 mL全血,用离心机(4 000 r/min)离心60 min制备血清用于生化指标的测定。
1.3.2生化指标及测定方法。用Scientific半自动生化分析仪进行血液生化指标的测定。谷丙转氨酶(GPT)活力、谷草转氨酶(GOT)活力、总蛋白、白蛋白、乳酸脱氢酶(LDH)活力、胆碱脂酶(CHE)活力、酸性磷酸酶(ACP)活力、碱性磷酸酶(ALP)活力按照试剂盒使用说明操作。
2结果与分析
黑鲷血液生化指标的测定结果见表1,黑鲷血液中血清总蛋白为(61.54±2.81)g/L,血清白蛋白为(31.95±4.47)g/L,GOT活力为(86.00±10.98)U/L,GPT活力为(42.68±5.65)U/L,ACP活力为(2.73±0.96)U/L,ALP活力为(42.38±5.31)U/L,CHE活力为(149.38±16.31)U/L,LDH活力为(196.89±15.12)U/L。根据对各项指标测定值范围与标准差的统计分析可以看出,黑鲷血液性状稳定,很适合作为试验鱼类开展各项指标的研究。
3讨论
对鱼类血液指标的研究具有重要意义,关于鱼类血液的生化指标的研究已有很多报道,由表2可知,黑鲷的血液生化指标与鲢鱼[7]、鲤鱼[8]、草鱼[9]、欧洲鳗鲡[10]、鲫鱼[11]等相比,其血液性状指标处于较高水平。如黑鲷血清总蛋白、白蛋白含量与其他鱼类相比处于高等水平;血清谷草转氨酶和谷丙转氨酶活力较其他鱼类高;血清乳酸脱氢酶活力与欧洲鳗鲡相比较低,血清胆碱脂酶活力比欧洲鳗鲡高。鱼类血液的生化指标具有重要的应用价值。当鱼体发生病变或生活环境发生改变时,许多生化指标会发生明显改变。根据其血液生化指标的变化,可以判断鱼体的生理变化,有利于鱼类疾病的诊断和环境监测。
3.1血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶
谷丙转氨酶(GPT)和谷草转氨酶(GOT)是广泛存在于动物线粒体中的重要的氨基酸转氨酶,在机体蛋白质代谢中起重要作用。鱼体中这2种酶的活性常被用来作为检测鱼体病理毒理变化的指标。
鱼体肝脏中含有丰富的GPT,在正常情况下,只有少量被释放到血液中,因此血清中正常转氨酶活性值较小;但是当肝脏受到损伤时,这些酶会大量释放到血液中,从而引起血清中该酶浓度上升或活性突然持续性增强[12]。因此,鱼体血清中GPT活性检测是检验鱼体肝功能受损状况的灵敏指标之一。翟良安等[13]研究表明,“浸螺杀”在1.12 mg/L浓度以上时,GPT活力上升,明显对鲤鱼肝功能造成损伤。
GOT主要存在于鱼体的心肌细胞中,在心肌细胞受损或通透性增高时,就会将此酶释放于血液中。米瑞芙等[14]的研究表明,病鲢血清中GOT活力显著高于正常鲢鱼。正常鲢鱼血清中GOT活力为115.08 U/L,病鲢血清GOT活力为377.57 U/L,显示病鲢心肌受损严重[10]。该试验中黑鲷GPT及GOT活力均显著高于其他鱼类,这充分说明不同种类的鱼类在血液指标上存在较大差异。
3.2血清总蛋白、白蛋白
鱼体血清内蛋白质在各种生理活动中有重要作用,尤其是白蛋白,对维持鱼体足够血量及胶体渗透压有重要意义,并且鱼类总蛋白的含量因种类不同而有差异,其含量从另一方面也表明鱼类的经济价值,白蛋白是鱼体重要的免疫蛋白,与鱼体的抗病及环境适应能力有密切的关系,可以用来诊断鱼类健康、营养和疾病等状况。由表2可知,该试验测得的黑鲷血清白蛋白含量高于其他鱼类,由此可以推断黑鲷是一种免疫力较高、抗病力较强的鱼类。科迪埃等观察鱼类在窒息时的血清白蛋白含量的变化情况时,发现丁鲑和石鲉在窒息时会引起蛋白质的异化,血清白蛋白含量减少。米瑞芙等[14]在研究中发现,患败血症的鲢鱼由于严重出血,蛋白质大量丢失,导致血清白蛋白含量明显下降。饥饿也是影响血清白蛋白含量变化的原因之一,一般认为饥饿会引起白蛋白含量的减少。钱云霞等[15]发现,养殖鲈鱼血清中白蛋白含量在饥饿1周时有所增加,饥饿2周虽有回落但还是高于正常组,饥饿3周时略低于正常组,饥饿4周时继续下降。
3.3乳酸脱氢酶、胆碱脂酶
乳酸脱氢酶(LDH)是生物体代谢中的一种重要的酶,存在着多种同工酶。自20世纪60 年代以来,人们对硬骨鱼类的LDH同工酶做了较为广泛的研究,表明其具有明显的组织特异性和种质差异。胆碱脂酶(CHE)则广泛分布于脊椎生物和非脊椎生物中,是一种水解酶,可以催化维生素复合物体脂的水解。脊椎动物的CHE分为2类:乙酰胆碱脂酶(AChE)和丁酰胆碱脂酶(BChE)。AChE主要存在于中枢神经系统灰质、红细胞、交感神经节和运动终板中,BChE存在于中枢神经系统白质、血清、肝、肠、黏膜下层和一些腺体中。这2种酶的酶作用物不同:AChE水解底物碘化乙酰胆碱(ASCH)比其他维生素复合物体脂要快,但是水解碘化丁酰硫胆碱(BSCH)活性不大。相反,BChE的主要水解底物为ACSH和BSCH。该试验则是对血清中BChE的活力进行测定,黑鲷的LDH活力值和欧洲鳗鲡较为接近,偏低于其他鱼类,说明因为鱼种的不同,其差异性较大。而CHE活力与欧洲鳗鲡相比较数值偏高,催化维生素复合物体脂水解的速率要比欧洲鳗鲡快。
3.4酸性磷酸酶、碱性磷酸酶
酸性磷酸酶(ACP)是高等动物体内巨噬细胞溶酶体的标志酶,在体内直接参与磷酸基团的转移和代谢,主要存在于人体的肝脏、脾脏、红细胞、骨髓部位。在鱼类体内,溶酶体酶一般具有防御和消化的双重作用,溶酶体酶的水解作用成为机体攻击异物的主要机制之一,其主要来源是肝脏、肠(下转第312页)
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胃和血液。而ACP是吞噬溶酶体的重要组成部分,在血细胞进行吞噬和包囊反应中,会伴随有ACP的释放。碱性磷酸酶(ALP)几乎存在于高等动物的各个组织中,在肠上皮、肝脏、白细胞、成骨细胞等部位尤其丰富,血清中的ALP主要来源于肝脏和骨骼。ALP是生物体内的一种重要的代谢调控酶,直接参与磷酸基团的转移和钙磷代谢,在脊椎动物的骨化作用中起重要作用。在鱼类体内同样有ALP,同时也作为鱼类溶酶体酶的重要组成部分,在免疫反应中发挥作用。到目前为止,国内外有关黑鲷的血液生化研究资料较少,在有关鱼类生理资料中,关于黑鲷血清中ACP和ALP的正常值还未见报道,为了给黑鲷各项生理机能的深入研究提供依据,迫切需要对健康无病的黑鲷血清中ACP和ALP的指标进行测定。
4参考文献
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