文章编号 1007-5739（2016）24-0265-03
Research Progress on Rapid Detection and Identification Methods for Listeria Monocytogenes
LI Bo 1，2 ZHAO Wen-sheng 1 WANG Guo-zhu 1 FENG Guan 1 WU Wen-hao 1 WANG Dan-dan 1，2
（1 Yanjiao Office of Hebei Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau，Yanjiao Hebei 065201； 2 Yanjiao Branch Center of Hebei Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau Inspection and Quarantine Technical Center）
Abstract Listeria monocytogenes is a kind of facultative pathogens of human and animal，its detection and identification has become the focus of prevention and control of food borne diseases.In this paper，rapid detection methods and detection limit of Listeria monocytogenes at home and abroad were compared，and the future development direction of the rapid detection of Listeria monocytogenes was discussed.
Key words Listeria monocytogenes；rapid detection；molecular detection
单增李斯特氏菌（Listeria monocytogenes）是一种重要的人兽共患病病原体，也是一种最为常见的食源性病原菌，WHO将其列为20世纪90年代食品中四大致病菌之一。单增李斯特氏菌广泛存在于肉制品、乳制品、水产品以及土壤中，4 ℃的环境中仍可生长繁殖，是冷藏食品威胁人类健康的主要病原菌之一[1]。随着生活节奏的加快，快餐食品逐渐受到我国人们的欢迎，单增李斯特菌的危害也随之而来，因此对李斯特菌的检测工作尤为重要。传统的李斯特菌检测方法繁琐，耗时长，灵敏度低，难以满足市场需求。发展快速准确、操作简便的检测与鉴定单增李斯特氏菌的方法对于提高食品卫生水平、保证食品安全具有重要的意义。
目前，单增李斯特菌的检测方法中较常用的还是国标法[2]。随着食品检测技术的持续发展，高灵敏度的单增李斯特菌的快速检测方法不断完善，国内外对李斯特菌的快速检测技术有了突飞猛进的发展，主要分为免疫学检测、分子生物学检测，生物传感器，自动化检测及联合检测方法。快速检测方法大大提高了检测的灵敏度，缩短了检测时间，成为未来食品检测主要的发展方向。
1 免疫学检测
免疫学检测法是利用抗体与抗原特异性结合的原理进行检测的方法，抗体与检测方法的不同，直接影响了单增李斯特菌的检测限。主要的检测方法有酶联免疫吸附测定（ELISA）、酶联荧光分析法（ELFA）和免疫磁性分析（IMS）等[3]。
1.1 ELISA法
ELISA法是抗原或抗体与酶形成的酶结合物与底物反应，催化生成带色产物，根据颜色深浅进行定性定量的检测方法。应用于食品安全检测的ELISA试验不断创新，Bhunia等建立的夹心ELISA法在20～24 h检出限为8～10 cfu/g（mL）[4]。赵 丽等[5]采用单增李斯特菌液相芯片，利用微球偶联结合双抗夹心技术测定偶联率，检测限为103 cfu/mL。現在已有德国拜发公司生产的商品化的单增李斯特菌检测试剂盒可供使用，用ELISA方法操作较简单，特异性强，反应灵敏度高，但由于单克隆抗体制备昂贵，所以用ELISA盒进行多种食品样品的检测费用较高。
1.2 ELFA检测法
ELFA法将荧光标记物添加到抗体上，通过测定荧光强度检测单增李斯特菌的数量，大大提高了检测的灵敏度。Jaakohuhta 等[6]利用时间分辨荧光免疫分析法进行污染食品检测，用时16 h，灵敏度为20 cfu/mL。Shi L等[7]运用测流免疫层析法20 min内检出限为104 cfu/mL，特异性良好。免疫层析试纸条法方法方便，但存在一定的漏检率，稳定性有待进一步提高。
1.3 IMS检测
IMS依据抗原抗体原理，通过磁珠的富集缩短增菌时间，降低单增李斯特菌的检测限。免疫磁珠检测方法可快速特异地检测出食品中单增李斯特菌，具有高灵敏度[8]。免疫磁性分离IMBS与PCR和ICG结合方法15 h测得检出限为100 cfu/mL[9]。免疫磁珠-选择性培养基检测法9 h牛奶样品检测限为0.4 cfu/mL[10]。纳米磁珠低场磁共振技术的线性检测范围为 1～103 cfu/mL[11]。超顺磁免疫层析技术现已在临床诊断、食品检验等领域得到广泛应用，已有104 cfu/mL的灵敏度[12]。目前Matrix生产的Pathatrix快速检测系统属于世界最快的检测方法之一[13]。磁珠的立体结构扩大了反应面，促使IMS受到各检测领域的广泛关注，但灵敏度还需进一步提高。
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