材料与方法
（一）材料与仪器
新鲜绣球菌，LY0-1.0m2真空冷冻干燥机，GZX-9240MBE热风干燥机，葡萄糖，乙醇，硫酸，苯酚，以上试剂均为国产分析纯。
（二）提取工艺
1.干燥前预处理：新鲜绣球菌主要由柄基和子实体组成，人工切除绣球菌的柄基，将其子实体剪切成相同的体积，将新鲜绣球菌置于清水中清洗泥土等杂质，最后放置在托盘上沥干。
2.干燥：将新鲜绣球菌平均分成两份，分别放入热风干燥机和冷冻干燥机中干燥.将干燥后的绣球菌密封保存，防止受潮。
3.子实体多糖的测定：采用NY/T 1676—2008《食用菌中粗多糖含量的测定》中的苯酚硫酸法。
绣球菌多糖提取：采取水煮醇沉法，称取0.5g粉碎过20mm孔径筛的绣球菌样品，精确到0.001g，水溶超声，水溶浸提，即为多糖提取液，将多糖提取液进行减压抽滤、浓缩、4℃下醇析过夜、离心、弃上清液，所得沉淀用体积分数75%乙醇洗涤两次后，常规干燥后得绣球菌多糖，多糖用60℃蒸馏水溶解，将多糖样液稀释到适当体积测定其质量分数。
标准曲线制定：分别吸取0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL标准葡萄糖工作溶液置于20mL具塞玻璃试管中，用蒸馏水补至1.0mL，向试液中加入1.0mL苯酚溶液，然后快速加入5.0mL浓硫酸，静置10min。使用涡旋振荡器使反应液充分混合，然后将试管置于30℃水浴中反应20min，于波长490nm处测吸光度，以吸光度为纵坐标，葡萄糖质量浓度为横坐标，制定标准曲线，得回归方程y=0.01861x+0.01642，R2=0.998。
绣球菌样品多糖测定：吸取1.00mL样品溶液于20mL具塞试管中，按上述步骤操作，测定吸光度，同时做空白实验，计算不同干燥方法绣球菌微粉样品中多糖含量得率。
（三）优化设计
1.单因素试验。以绣球菌多糖得率为指标，采用单因素试验确定影响提取效果的主要因素.单因素试验选取液料比20∶1、30∶1、40∶1、50∶1、60∶1（mL/g），每次提取时间2h，提取温度80℃，研究液料比对多糖得率的影响.对可能影响多糖得率的其他几个因素（超声时间、提取时间、提取温度、超声时间）分别做单因素试验，每组试验重复3次，取平均值。
2.正交试验设计。在预实验的基础上确定料液比、提取时间、提取温度三个因素.选用L9（34）正交试验设计，以绣球菌多糖得率为试验指标，来优化最佳的提取工艺条件，优化提取工艺的因素和水平。如表1所示。
二、结果与分析
由表2中正交试验结果可知，不同因素对真空冷冻干燥绣球菌提取的多糖得率的影响因大小顺序为：提取温度>提取时间>料液比，各因素较佳的组合水平为料液比1∶40，提取时间为2h，提取温度为80℃。
由表3中正交试验结果可知，不同因素对热风干燥绣球菌提取的多糖得率的影响因大小顺序为：提取温度>提取时间>料液比;各因素较佳的组合水平为料液比1∶50，提取时间为2h，提取温度为100℃。
三、结语
本文为确定绣球菌最佳的干燥提取方案，分别不同温度、料液比、浸提时间进行考察试验。在研究最佳的提取温度，对料液比和浸提时间进行研究。选择提取温度从80～100℃进行双因素考察试验，以提取所得糖分质量百分比为考察指标，最后得出结论，选择料液比为1∶40，浸提时间2h，浸提温度为80℃对绣球菌有效部位进行β-葡聚糖的含量检测。为研究最佳的干燥工艺，对干燥方式探讨，确定采用冷冻干燥技术对样品进行干燥处理。
参考文献：
[1]董彩红，马琪琪.珍稀食用菌绣球菌研究进展[J].菌物研究，2014，12（3）：172-176.
[2]陈伟.4大营养成分为你健康加分[J].信息博览，2010，（04）：75.
[3]薛道帆，周立平，何传俊，陈小林.绣球菌的保健、药效功能及其研究开发概况[J].浙江食用菌，2008，16（1）：54-56.
Optimization of Extraction Process of Polysaccharides from Different Drying Methods of Sparassis crispa
JIN Yuan-bao，XU Yi-min，MA Ying-bo，LI Zhuo-wei
（Department of Chemistry and Pharmacy，Zhuhai College of Jilin University，Zhuhai，Guangdong 519041，China）
Abstract：This paper of Sparassis crispa of polysaccharide extraction and content determination by single factor experiment analysis of Sparassis crispa drying method，solid-liquid ratio，extraction time，extraction temperature on the extraction rate of beta glucan. On this basis，the orthogonal design optimization of polysaccharide extraction process. So as to determine the optimum extraction condition of Sparassis crispa polysaccharide. This method is fast，accurate，high extraction rate，as Sparassis crispa polysaccharide extraction method.
Key words：sparassis crispa;β-dextran;polysaccharide detection
推荐访问： 多糖 绣球 提取 干燥 优化
