摘要 以荷叶为原料，采用乙醇水浴浸提对其中总黄酮的提取工艺进行了研究。通过单因素试验和正交试验，确定出各因素对总黄酮得率的影响顺序为：B（料液比）>D（乙醇浓度）>A（提取温度）>C（提取时间），从而得到乙醇提取荷叶总黄酮的最佳工艺条件为：提取时间90 min、乙醇浓度80%、料液比1∶40（g∶mL）、提取温度40 ℃。正交试验表明，重现性和稳定性试验与正交试验所得的结果一致。该研究为荷叶总黄酮的开发利用提供了新的方法与依据，具有很重要的现实意义。
关键词 荷叶；总黄酮；提取工艺
中图分类号 R284.2 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2014）06-0097-02
Study on the Extraction Technology of Flavonoids from Lotus Leaves
YOU Lin-hong JIE Jing * YANG Ming-li CAI You-sheng
（Department of Pharmaceutical Engineering，Wuhan Bioengineering Institute，Wuhan Hubei 430415）
Abstract Taking lotus leaf as raw material，using ethanol water bath extraction on the extraction process of total flavonoids was studied. Through single factor test and orthogonal test，the various factors on the yield of total flavonoids of order：B（the ratio of material to liquid）>D（ethanol concentration）>A（extraction temperature）>C（extraction time）.In order to get the best technological conditions of extracting the total flavonoids from lotus leaf ethanol as：extraction time was 90 min，ethanol concentration was 80%，ratio of solid-liquid was 1∶40（g∶mL），extraction temperature was 40 ℃.Orthogonal test results showed that the reproducibility and stability test were the same as orthogonal test results.This study provided a new method and basis for the development and utilization of the total flavonoids from lotus leaf，and it′s had very important practical significance.
Key words lotus leaves；total flavonoids；extraction process
荷叶（Folium Nelumbinis）为睡莲科植物莲（Nelumbo nuciferea Gaertn）的干燥叶，为我国民间常用中药材。在我国南北均有栽培，主产于湖北、湖南、浙江、江苏等地。荷叶营养丰富，除含有脂类、糖、蛋白质和单宁等外，还含有黄酮和生物碱。荷叶性味苦，涩，平，归肝，脾，胃和心经，有清暑利湿、升发清阳及凉血止血等功效。从荷叶中提取的总黄酮，具有降血脂、抗过敏、防癌、抗衰老、抑菌、抗氧化、治疗心血管疾病等多种功效[1]。荷叶黄酮粗提液可显著抑制高胆固醇症和动脉硬化，抗自由基和降脂减肥[2]。1991年11月，荷叶被国家卫生部批准列入药食两用的天然植物名单[3]。开发利用荷叶已成为热点[4]。该文用乙醇水浴浸提，通过正交试验优化荷叶总黄酮的提取工艺条件，以供参考。
1 材料与方法
1.1 材料、仪器与试剂
试验材料为新鲜荷叶（10月采于武汉生物工程学院，烘干，过40目筛粉碎，即得荷叶粉，放入干燥箱中备用）。供试仪器有SHZ-III循环水真空泵、UV-240紫外分光光度计（上海精密科学仪器有限公司）、高速离心机（上海安亭科学仪器厂）、电子天平、恒温水浴锅。供试试剂为芦丁（化学标准品，含量98.7%，中国药品生物制品检定所）、无水三氯化铝、无水乙醇等，均为分析纯。
1.2 标准曲线的制作
采用芦丁标准法[6]，取0.187 6 mg/mL芦丁标准溶液0、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0 mL分别装入8支具塞试管中，分别加入70%乙醇定容至10 mL后混匀，精确量取1.0 mol/L AlCl3溶液3.0 mL，摇匀，室温放置20 min。用UV-240型紫外分光光度计于波长415 nm处测定吸光度值，绘制标准曲线。
1.3 荷叶黄酮的含量测定
称取荷叶粉3 g，加入一定量不同体积分数的乙醇中，置恒温水浴锅中加热一定时间后取出，定容至100 mL。用测定标准曲线的方法处理样品，测定吸光度值，计算总黄酮得率。
1.4 单因素试验
1.4.1 提取温度的确定。在料液比为1∶30、提取时间为80 min、乙醇浓度70%的条件下，称取6份荷叶粉末，每份3 g，分别在40、50、60、70、80、90 ℃条件下提取，提取后测定料液中总黄酮的含量，以研究提取温度对提取结果的影响。
1.4.2 料液比的确定。在提取温度50 ℃、提取时间为80 min、乙醇浓度70%的条件下，称取6份荷叶粉末，每份3 g，选取料液比分别为1∶10、1∶20、1∶30、1∶40、1∶50、1∶60进行试验，提取后测定料液中总黄酮的含量，以研究料液比对提取结果的影响。
1.4.3 提取时间的确定。在料液比为1∶30、提取温度为50 ℃、乙醇浓度70%的条件下，称取6份荷叶粉末，每份3 g，选取提取时间分别为0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 h进行试验，提取后测定料液中总黄酮的含量，以研究提取时间对提取结果的影响。
1.4.4 乙醇浓度的确定。在料液比为1∶30、提取温度为50 ℃、提取时间为80 min的条件下，称取6份荷叶粉末，每份3 g，选取乙醇浓度分别为50%、60%、70%、80%、90%进行试验，提取后测定料液中总黄酮的含量，以研究乙醇浓度对提取结果的影响。
1.5 正交试验
如表1所示，在单因素试验的基础上，设计L9（34）正交试验来优化荷叶总黄酮的提取工艺。
2 结果与分析
2.1 芦丁标准曲线
如图1所示，所取标准液的浓度和吸光度值经回归处理，计算得回归方程y=0.013 6x-0.034 8，R2=1.000 0，其中x表示芦丁浓度，单位为μg/mL；y表示吸光度值。可见，芦丁浓度在10～40 μg/mL范围内与吸光度值线性关系良好。
2.2 温度对提取效果的影响
如图2所示，当提取温度为50 ℃时，提取液的吸光度最高，提取效果最好；提取温度超过50 ℃时，提取液的吸光度下降，说明高温不利于荷叶中总黄酮的提取，温度太高可能会破坏活性成分，且高温提取出的杂质也相应增多，给后续操作带来不便，成本增大。综合各方面因素考虑，正交试验提取温度以40～60 ℃为宜。
2.3 料液比对黄酮提取效果的影响
液料比的大小会影响两相的混合情况，尤其在搅拌不充分的情况下，会改变表观传质系数，从而影响传质速率。在一定的条件下，液料比越大，越有利于总黄酮的溶解，液料比达到一定程度，溶质溶出率达到了动态平衡，若液料比过大，导致母液的体积大，不仅增加了提取液的消耗，而且增加了后续工作的难度和物料消耗，同时造成提取率下降[7]。由图3可知，当料液比为1∶40（g∶mL）时，提取液的吸光度最高，提取率最大；但考虑到溶剂量太大，不利于操作，增大溶剂量也给工业生产造成浪费。因此，选取液料比1∶40（g∶mL）左右为佳。
如图4所示，当提取时间<90 min，随着时间的延长，吸光度不断增大，当提取温度>90 min，随着时间的延长，吸光度反而变小，考虑实际情况，提取时间应该选取90 min左右为宜。
2.4 乙醇浓度对提取效果的影响
如图5所示，随乙醇浓度的增加，吸光度增大。当乙醇浓度达到80%时，总黄酮溶解度最大，此时吸光度最大，提取率最高。但当乙醇浓度继续增加，总黄酮的提取率反而下降，这可能是因为乙醇浓度增加，提取出的脂溶性物质越多，荷叶中总黄酮的浓度下降。因此选择乙醇浓度60%～80%为正交试验提取溶剂的浓度范围。
2.5 正交试验确定最佳工艺参数
如表2所示，各因素对荷叶黄酮提取率的影响按大小次序排列分别为：RB>RD>RA>RC，因此，影响荷叶黄酮提取效果各因素的主次顺序为B（料液比）、D（乙醇浓度）、A（温度）、C（提取时间），得出较优试验组合为A1B3C3D3，即料液比为1∶40，乙醇浓度为80%，提取温度为40 ℃，提取时间为90 min。
3 结论与讨论
试验结果表明，提取温度、料液比、时间、乙醇浓度均会影响总黄酮的提取率，其中液料比影响最大，其次是乙醇浓度，提取温度和提取时间影响作用相对较小，但也不可忽视。荷叶黄酮最佳提取工艺条件为：乙醇浓度为80%，料液比为1∶40，提取温度为40 ℃，提取时间为90 min。此条件下的得率为3.78 mg/g。
4 参考文献
[1] 陈仙菊，唐维，赵杨杨，等.荷叶黄酮最新提取优化工艺研究比较及最新应用领域分析[J].吉林农业，2011（10）：22-23.
[2] 靳素荣，姚礼峰，李辉，等.微波法提取荷叶黄酮及抗氧化作用研究[J].安徽农业学报，2006（8）：40-42.
[3] 范继善.食用食品添加剂[M].天津：天津科学技术出版社，1999：322-333.
[4] 杜力军，孙虹，李敏，等.荷叶大豆及其合剂调脂活性部位的研究[J].中草药，2000（7）：526-528.
[5] 马长伟，曾明勇.食品工艺学导论[M].北京：中国农业出版社，2002.
[6] 张赟彬，李彩侠，李军，等.荷叶黄酮提取工艺研究[J].食品研究与开发，2005（1）：25-26.
[7] 王俊杰，龙婷，曹欣，等.荷叶黄酮对油酸孵育的HepG2细胞甘油三酯代谢的影响[J].中国药理学通报，2010（12）：1626-1630.
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