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摘 要：以鱼粉、豆粕、棉粕、菜粕为蛋白源，以豆油为脂肪源配制基础饲料，按1%、2%、3%的剂量添加蜂花粉至基础饲料中制成3种试验组饲料，在室外池塘中对黄尾鲴开展为期8周的摄食生长试验。结果表明：2%和3%蜂花粉组亲鱼性成熟比例显著高于对照组和1%蜂花粉组（P<0.05），其亲鱼性成熟比例为85%以上，而对照组为65%;从卵子质量来看，对照组黄尾鲴亲鱼卵径、受精率、孵化率以及出膜仔鱼全长显著低于添加蜂花粉组（P<0.05）;从精子质量看，亲鱼日粮中添加高比例的蜂花粉能显著提高雄性亲鱼的繁殖性能（P<0.05），与对照组相比，2%蜂花粉组可提高精子密度45.3%，提高精子活力12.7%，精子畸形率下降21.0%。综合考虑，2%蜂花粉为黄尾鲴亲鱼最佳添加量。
关键词：饲料;蜂花粉;黄尾鲴;繁殖性能
中图分类号：S917.4文献标识码：A文章编号：1006-060X（2018）10-0084-03
Effects of Different Levels of Bee Pollen in Feed on Reproductive Performance of
Xenocypris davidi Bleeker
LI Cai-gang，ZHANG Hai-xin，HU Wen-juan，WAN Jin-tao，LUO Nan，HUANG An-qi，ZHANG Yan-ping
（Jiangxi Fisheries Research Institute， Nanchang 330039， PRC）
Abstract： Feeding growth test of Xenocypris davidi Bleeker was carried out in outdoor ponds for 8 weeks; three experimental group feeds were made by adding bee pollen to the basic feed at the dosage of 1%， 2% and 3%， with fish meal， soybean meal， cotton meal and vegetable meal as protein source， and soybean oil as fat source for basic feed. The results showed that： the sexual maturation rate of the parent fish in the bee pollen group with the addition of 2% and 3% was significantly higher than that in the control group and the bee pollen group with the addition of 1% （P<0.05）. From the perspective of egg quality， the egg diameter， fertilization rate， hatching rate and the length of membrane larvae in the control group were significantly lower than that in the bee pollen group （P<0.05）. From the perspective of sperm quality， the addition of high proportion of bee pollen in the diet of parental fish can significantly improve the reproductive performance of male parental fish （P<0.05）. Compared with the control group， the addition of 2% bee pollen increased sperm density by 45.3%， sperm motility by 12.7% and the rate of sperm malformation by 21.0%. All things considered， the best amount of yellowtail catfish was 2% bee pollen.
Key words： feed; bee pollen; Xenocypris davidi Bleeker; reproductive performance
黄尾鲴（Xenocypris davidi Bleeker）俗称黄尾、黄片、黄姑子、黄瓜鱼等，隶属于鲤科（Cyprinidae）鲴亚科（Xenocypri-ninae）鲴属（Xenocypris）[1]，是一种中小型淡水鱼类。亲鱼的营养對提高产卵量、受精率、孵化率和仔鱼质量以及仔稚鱼生长与存活等具有重要作用，对亲鱼的营养强化有助于提高其繁殖性能。为了获得大量的优质苗种，亲鱼的培育显得尤为重要。蜂花粉营养非常丰富，含有多种必需氨基酸、不饱和脂肪酸、黄酮类化合物、多糖、磷脂、维生素和微量元素等成分，国际上称其为“完全营养素”。国内外许多学者已将蜂花粉作为饲料添加剂广泛运用于动物饲料中，如王建桥等[2]在蛋鸡日粮中添加0.8%的蜂花粉，结果产蛋率、蛋鸡的抗病力以及抗应激性都有所提高;陈艳珍等[3]在蛋种鸡日粮中添加1.0%蜂花粉，其产蛋率、种蛋受精率、受精蛋孵化率等得到显著提高。蜂花粉作为饲料添加剂提高动物繁殖性能效果显著[4]，但蜂花粉作为饲料添加剂在水产动物饲料中的应用报道却较少。通过研究饲料中不同水平蜂花粉对黄尾鲴亲鱼繁殖性能的影响，探索其最佳添加量，以期为黄尾鲴规模化人工育苗和亲鱼饲料的配制提供理论依据。
1 材料与方法
1.1 试验材料
试验在萍乡市水产科学研究所进行，供试2龄黄尾鲴亲鱼由该研究所培育。正式试验前，用基础日粮驯养黄尾鲴一周。在亲鱼繁殖季节前2～3个月，从亲鱼池中随机挑选90尾性腺未发育成熟的雌性亲鱼（体重204.1±10.2 g）和90尾雄性亲鱼（体重159.8±7.6 g），随机分为4组，每组3个重复，每个重复20尾（雌∶雄=1∶1），分别置于12个自制养殖装置（规格为2 m×2 m×1 m），饲养于水深约80 cm的池塘中，进行正式试验。
试验用蜂花粉购自江西农业大学蜜蜂研究所，超微粉碎后备用。
1.2 试验方法
1.2.1 饲料配制 亲鱼基础饲料以鱼粉、豆粕、棉粕、菜粕为蛋白源，以豆油为脂肪源，对照组饲喂根据营养需求配制的基础日粮，营养成分：粗蛋白、粗脂肪、粗纤维、粗灰分分别为34.58%、7.62%、4.33%、9.76%。试验组在基础日粮中分别添加1%、2%、3%剂量的蜂花粉，以及3%、2%、1%的沸石粉，人工混合后使用（基础饲料配方如表1），对照不加蜂花粉，仅添加4%沸石粉。试验用原料均过60目筛，所有原料充分混合均匀后压制成直径为3 mm的颗粒饲料，烘干后储存在冰箱和冷库中备用。
1.2.2 亲鱼饲养管理 养殖试验在室外进行，自然光照。试验期间，每天以体重的3%～4%投喂自制试验膨化颗粒饲料，每天投喂2次，分别于每天9：00、16：00各投喂1次，每次投喂后1 h观察鱼的吃食情况并将残饵捞出，每日记录耗料，估算采食量。养殖池每14 d换水1次，换水量约为1/3，试验期8周。试验期间水温为17.8～26.5℃，水中溶解氧大于4.5 mg/L，pH值6.8～7.5。试验结束后，停止喂食使鱼饥饿24 h，测定各试验组鱼总重和尾数，按公式（1）、（2）计算成活率、性成熟系数。怀卵量采用重量取样法，即从卵巢中剪一小段性腺（0.1～0.5 g）放在干净载玻片上称重，并在显微镜下计算含有卵黄颗粒的全部卵粒数。相关指标计算公式如下：
成活率（%）=100×试验末鱼尾数/试验初鱼尾数 （1）
性腺成熟系数（%）=卵巢/体重×100 （2）
1.2.3 黄尾鲴的人工繁殖 5月上旬，对投喂的各组黄尾鯝亲鱼进行人工催产，获得黄尾鯝受精卵并孵化出膜。受精后的鱼卵放入孵化桶中孵化，水温控制在25±0.5℃，溶解氧5 mg/L以上，pH值7.0～8.0。利用Olympus ix53倒置荧光显微镜测定卵径、仔鱼长度。
1.2.4 精液采集及活力测定 （1）精液采集：将试验鱼置于浸过水的湿棉质毛巾，并用湿毛巾将鱼的头部全部遮盖;用干燥的棉质毛巾擦干鱼体生殖孔附近的水分，然后用手轻轻挤压腹部生殖腺部位，即可将精液挤出，用干净干燥的吸管吸取精液置于冰浴的1.5 mL离心管中，立即取样进行活力观察;挤压过程中防止尿液与体表水分混入精液。（2）精子活力测定：用移液枪吸取50 μL激活液于载玻片上，并移到视野内;以牙签挑取少许精液放入Olympus ix53显微镜下载玻片的液滴中，记录时间并进行观察;采用计数板测定法计算精子密度;采用载玻片计数法计算精子活力。精子的头部、中部、尾部畸形都为畸形精子。
1.2.5 数据处理 试验数据使用平均值±标准差（Mean±SD.）表示，采用Excel和SPSS 18.0统计软件进行方差分析，用Duncan"s检验进行多重比较，显著差异水平为P<0.05。
2 结果与分析
2.1 蜂花粉对黄尾鲴亲鱼繁殖性能的影响
由表2可知，各试验组亲鱼成活率均在95%以上，其中添加2%蜂花粉组的亲鱼成活率达到100%，而造成少量亲鱼死亡的原因是试验分组过程中对亲鱼的刺激引起了应激反应;随着蜂花粉添加量的增加，亲鱼的性成熟比例逐漸递增，对照组显著低于添加蜂花粉组（P<0.05），但2%蜂花粉组与3%蜂花粉组之间差异不显著;2%和3%蜂花粉组的亲鱼雌、雄性成熟系数无显著差异，但均显著高于对照组和1%蜂花粉组（P<0.05），其亲鱼性成熟比例达到85%以上，而对照组（基础日粮组）性成熟比例为65%;各试验组的绝对怀卵量和相对怀卵量之间无显著差异。
2.2 蜂花粉对黄尾鲴卵子质量的影响
由表3可知，随着蜂花粉添加水平的递增，其卵径、受精率、孵化率及出膜仔鱼全长逐渐递增，对照组显著低于添加蜂花粉组（P<0.05），但添加2%蜂花粉组与添加3%蜂花粉组之间无显著差异。
2.3 蜂花粉对黄尾鲴精子质量的影响
由表4可知，随着蜂花粉添加水平的递增，其雄性亲鱼的繁殖性能逐渐递增，其中与对照组相比，添加2%和3%蜂花粉组提高效果最显著（P<0.05），但两者之间无显著差异;其中，2%蜂花粉组可提高精子密度45.3%，提高精子活力12.7%，精子畸形率下降21.0%。
3 结论与讨论
蜂花粉对鱼类是安全的。大量研究表明，蜂花粉可作为一种无毒、无副作用的天然绿色饲料添加剂广泛应用于动物养殖中。在日粮中添加适量的蜂花粉可增强动物免疫功能，促进动物生长发育、提高饲料利用率、改善动物产品品质等，从而降低生产成本，提高经济效益。试验中观察发现，饲料中添加蜂花粉后，黄尾鲴亲鱼生长发育状况良好、应激反应小、病害少，整个养殖过程中没有出现不良反应。
蜂花粉含有多种营养物质，被誉为“最理想的天然营养品”[5]。近年来临床上将蜂花粉用于治疗男性器质性阳痿、男性精液异常性不孕症及女性更年期综合症，或用作饲料添加剂提升动物繁殖性能等，均取得较好效果[4]。付越等[6]研究发现蜂花粉可提高蛋鸡的产蛋性能、繁殖性能和蛋品质，降低死亡率。笔者的试验结果表明，在黄尾鲴亲鱼饲料中，添加不同水平的蜂花粉可显著提高黄尾鲴亲鱼性成熟系数、卵径、孵化率、出膜仔鱼长度（P<0.05），但不能增加其怀卵量。位孟聪[7]研究表明，在母鹅日常饲料中添加1.5%蜂花粉能显著提高其产蛋量、血清中的生殖激素（雌二醇、促卵泡素以及孕酮）水平等，但不能提高母鹅单枚蛋重，笔者的试验结果与其相悖。这可能是因为物种的差异，使其对蜂花粉的作用机制存在差异。
试验结果表明，蜂花粉能显著提高雄性黄尾鲴的精子密度、精子活力，并能降低精子畸形率，从而对雄性黄尾鲴亲鱼的繁殖性能产生积极影响。位孟聪[7]通过添加不同比例的蜂花粉饲喂鹅，发现蜂花粉能显著提高公鹅的精液量、精液密度以及精子活力等，笔者的研究结果与之相吻合。
综上所述，在该试验条件下，黄尾鲴亲鱼饲料中添加1%、2%和3%的蜂花粉能显著提高雌性及雄性黄尾鲴亲鱼的繁殖性能（P<0.05）。虽然2%和3%添加剂量之间无显著差异，但从性成熟系数、卵径、孵化率、出膜仔鱼长度、精子活力等方面来看，添加2%的蜂花粉效果更好。综合考虑，2%蜂花粉为黄尾鲴亲鱼最佳添加量。
参考文献：
[1] 付辉云，章海鑫，赵春来，等. 军山湖黄尾密鲴的形态学生物研究[J]. 江苏农业科学，2015，43（7）：247-249.
[2] 王建桥，金汤东. 肉用种鸡饲料中添加不同蜂产品对种鸡产蛋率的影响[J]. 浙江畜牧兽医，1999，（2）：7.
[3] 陈艳珍，张淑芬，庄淑芬. 蜂花粉对蛋种鸡生产性能及蛋品质影响的研究[J]. 中国禽业导刊，2000，（16）：30-31.
[4] 王开发，支崇远. 花粉中雌二醇和睾酮含量研究[J]. 养蜂科技，2004，（5）：2-3.
[5] 刘建涛，赵 利，苏 伟，等. 蜂花粉生物活性物质的研究进展[J]. 食品科学，2006，27（12）：909-912.
[6] 付 越，郝 璐，刘英博，等. 蜂花粉对蛋鸡生产性能和免疫功能的影响[J]. 饲料研究，2015，（9）：50-55.
[7] 位孟聪. 板栗蜂花粉对五龙鹅繁殖性能影响的试验研究[J]. 中国畜牧杂志，2016，52（20）：63-67.
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