材料与方法
1.1 材料
1.1.1 样品
2016年9月从上海市郊区采集土样,除去表层土,取距表层5~10 cm土壤100 g,装入已灭菌的牛皮纸袋中,于室温下自然风干3~10 d,碾碎过筛后,在50 ℃下烘1 h,取1 g土样加入10 mL灭过菌的0.005 mol/L磷酸缓冲液[pH值为7.0,其中含6.00%蛋白胨和0.05%十二烷基硫酸钠(SDS)]中,50 ℃下振荡10 min[18]。
1.1.2 試剂
ε-PL对照品购自郑州拜纳佛生物工程股份有限公司;酶及引物购自生工生物工程(上海)股份有限公司;DNA提取试剂盒购买自碧云天生物技术有限公司;其他试剂均为分析纯,购自国药集团化学试剂有限公司。
1.1.3 仪器
PCR仪(BIO-RAD),高压蒸汽灭菌锅(SANYO),电泳仪(BIO-RAD),SBA-40D生物传感分析仪(山东省科学院生物研究所),5 L发酵罐(Sartorius Stedim Biotech GmbH),高效液相色谱仪(岛津公司)等。
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