摘要：目的建立同时测定四逆散中芍药苷、柚皮苷、橙皮苷、甘草酸的高效液相色谱方法,为科学评价及有效控制其质量提供可靠方法,并为四逆散的药效物质研究奠定基础。方法采用Kromasil C18柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),流动相为乙腈-0.05%磷酸水溶液,梯度洗脱,检测波长为240 nm,流速1.0 mL/min,柱温30 ℃。结果芍药苷、柚皮苷、橙皮苷、甘草酸分别在0.00225～0.01125 μg(r＝0.999 7)、0.00390～0.00195 μg (r＝0.9997)、0.00198～0.00099 μg(r＝0.999 5)、0.00262～0.00131 μg(r＝0.999 7)范围内线性关系良好,平均加样回收率分别为97.72%(RSD＝1.02%)、98.45%(RSD＝1.52%)、97.74%(RSD＝1.63%)、98.34%(RSD＝1.78%)。结论所建立的方法简单、准确、可靠,重复性好,可用于四逆散的质量控制。
关键词：四逆散；芍药苷；柚皮苷；橙皮苷；甘草酸；高效液相色谱法
DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2014.07.022
中图分类号：R284.1文献标识码：A文章编号：1005-5304(2014)07-0074-04
Simultaneous Determination of Four Active Compounds in Sinisan by RP-HPLCLI Yue-feng, WU Ping"an, WANG Rui-qiong, NING Yan-mei, HUANG Yu-fang, YAN Xing-ke (Gansu University of TCM, Key Laboratory of Chemistry and Quality for Traditional Chinese (Tibetan) Medicines of the College of Gansu Province, Lanzhou 730000, China)
Abstract：Objective To build a method to simultaneously determine paeoniflorin, naringin, hesperidin, glycyrrhizic acid in Sinisan by HPLC, provide a reliable method for evaluation and effective quality control, and lay the foundation of material basis for efficacy research for TCM compound Sinisan. Methods The column was Kromasil C18 (4.6 mm×250 mm, 5 μm)；mobile phase was acetonitrile-0.05% phosphoric acid aqueous solution with gradient elution program；the flow rate was 1.0 mL/min；UV detection was performed at 240 nm；the detector drift tube temperature was set at 30 ℃. Results The linear ranges of paeoniflorin, naringin, hesperidin and glycyrrhizic acid were 0.00225-0.01125 μg (r＝0.999 7), 0.00390-0.00195 μg (r＝0.9997), 0.00198-0.00099 μg (r＝0.999 5), 0.00262-0.00131 μg (r＝0.999 7), respectively. The average recoveries of paeoniflorin, hesperidin, naringin and glycyrrhizic acid were 97.72% (RSD＝1.02%), 98.45% (RSD＝1.52%), 97.74% (RSD＝1.63%), 98.34% (RSD＝1.78%), respectively. Conclusion The method is accurate, simple, reliable and duplicable, and is available for the quality control of Sinisan.
Key words：Sinisan；paeoniflorin；naringin；hesperidin；glycyrrhizic acid；HPLC
四逆散首载于《伤寒论》,由柴胡、白芍、枳实、甘草4味药物组成,为和解少阳、调和肝脾的基础方剂,具有解郁透热、疏肝理脾、宣散气血郁滞之功。近年来采用指纹图谱对中药复方进行药效学研究[1-2],发现四逆散冻干粉在改善睡眠、提高睡眠质量方面具
基金项目：国家自然科学基金(81073077)；教育部科学技术研究重点项目(212186)；甘肃省省自然科学研究基金计划(1010RJZA212)；甘肃省高等学校基本科研业务费项目(2013-2)；甘肃中医学院引进人才科研启动基金(2010-3)
通讯作者：严兴科,Tel：0931-8765585,E-mail：lyfyxk@126.com
有独特疗效[3]。四逆散的有效物质基础是国内外研究热点,如郭氏[4]用大孔吸附树脂对四逆散全方煎煮液进行富集纯化,李氏[5]比较研究了醇沉法、超滤法、澄清剂法、大孔树脂吸附法等多种方法对四逆散水提液进行精制,但这些研究仅考察单一有效成分(芍药苷)精制前后含量的变化。药理研究表明,芍药苷、柴胡皂苷a、柚皮苷、甘草次酸4种物质是四逆散全方抗炎和免疫抑制药效的主要效应成分[6],且这4种成分在按照复方中比例联合给药时表现出显著的药效协同作用[7]。为保证本制剂药效,适应现代中药制剂多指标成分控制的要求,本试验建立高效液相色谱法(HPLC)同时测定芍药苷、橙皮苷、柚皮苷、甘草酸4种有效成分含量的方法,为其质量控制提供参考。
1仪器与试药
Warters 2695-2966高效液相色谱仪(美国),PDA检测器；Kromasil C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm), C18保护柱,大连依利特分析仪器有限公司；B3200S-T超声震荡仪(必能信超声上海有限公司)；Millipore纯水制备系统。
柴胡,为伞形科植物柴胡Bupleurum chinense DC.(北柴胡)的根,购于河北省安国市康信义药材行,产地陕西,批号0951084F。白芍,为毛茛科植物芍药Paeonla lactiflora pall.,购于哈尔滨市世一堂中药饮片厂,产地杭州,批号0901152S。枳实(炙),为芸香科植物酸橙Citrus aurantium L.的干燥幼果,购于哈尔滨市世一堂中药饮片厂,产地福建,批号0912023Ch。甘草(炙),为豆科植物甘草Glycyrrhiza uralensis Fisch.的干燥根及根茎,购于哈尔滨市世一堂中药饮片厂,产地内蒙古,批号0911067M。以上药材均经本校生药学教研室李成义教授鉴定。
推荐访问： 测定 含量 有效成分 RP HPLC
