评价指标及分组给药
Wistar大鼠适应性饲养1周,随机分为正常组(10只,雌雄各半)和实验组(20只,雌雄各半)。正常组以纯化饲料饲养,实验组依据《中药治疗脾虚证的临床研究指标原则》和《中医湿病学》[15,16]釆用“饮食失节(高脂低蛋白饮食)+劳倦过度(负重游泳)”复合因素诱导,建立脾虚水湿不化证大鼠模型,按毛色、体重消瘦、自主活动等指标评分,评价模型。造模成功[6]后将实验组随机分为模型组与黄芪黄酮组(每组各10只,雌雄各半),黄芪黄酮组根据2015版药典成人日服黄芪最高剂量(30g/70Kg)及等效剂量系数折算法换算[17],给予大鼠黄芪黄酮提取物0.07g/kg,正常组与模型组给予等量生理盐水,每天灌胃给药1次,连续2周。实验过程中各组老鼠出现死亡(正常组1只(雄性),模型组2只(1雄1雌),黄芪黄酮组2只(2雌)),造模结束后25只老鼠纳入代谢组学实验用。
2.5血浆样品的采集与处理
大鼠行腹腔麻醉,腹主动脉取血,肝素钠抗凝,离心15min,上清液于 80℃保存。分析前血浆样本室温解冻,准确吸取300μL,加入600μL甲醇,涡旋1.5min,4000r/min离心15min,上清液经0.22μm微孔滤膜过滤后分析。
2.6实验方法
2.6.1色谱条件色谱柱为HaloC18柱(100mm×2.1mm,2.7μm,美国AdvancedMaterialsTechonology公司),经色谱条件优化,流动相A为0.05%甲酸,B为0.05%甲酸乙腈。梯度洗脱:0~10min,90%~70%A;10~20min,70%~40%A;20~28min,40%A;28~30min,40%~36%A。进样量5μL,流动相流速为0.3mL/min,柱温25℃。
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