报告基因的gus组织化学检测和目的基因的PCR检测，然而获得优良的半夏转基因植株还要继续对阳性植株进行检测，包括Northern和Western blotting等分子生物学技术[6]。另外，半夏作为药用植物，今后除了对半夏抗性植株进行抗高温等逆境胁迫试验，必须对半夏的次生代谢产物方面进行综合评价。
[参考文献]
[1] 中国药典.一部[S]. 2010：110.
[2] 顾德兴，李云香，徐炳生. 半夏的繁殖生物学研究[J].植物资源与环境，1994，3（4）：44.
[3] 邓家术，段彬江，刘中来. 植物热激蛋白的研究进展及其应用[J].生命的化学，2003，23（3）：226.
[4] 薛建平，司怀军，田振东. 植物基因工程[M]. 合肥：中国科学技术大学出版社， 2008：147.
[5] 贾永芳. 半夏离体培养研究及遗传转化的初探[D].重庆：西南农业大学，2003.
[6] 王新颖，文晓鹏，胡鹏. 利用农杆菌介导法获得转ipt基因半夏植株[J]. 华中农业大学学报，2009，28（6）：664.
[7] 薛建平，朱艳芳，张爱民，等. 半夏试管块茎直接再生技术的研究[J].作物学报，2004，30（10）：1060.
[8] 袁维风，钱玉梅，徐德聪，等. 影响草莓遗传转化率的因子及转CBF1基因植株的获得[J]. 江苏农业学报，2009，25（5）：1124.
[9] 谢志兵，钟晓红，邓子牛. 农杆菌介导几丁质酶基因对草莓转化条件的建立[J].湖南农业大学学报：自然科学版，2008，34（1）：25.
[10] 王紫萱，易自立. 卡那霉素在植物转基因中的应用及其抗性基因的生物安全性评价[J]. 中国生物工程杂志，2003，23（6）：9.
[11] Ding L，Li S，Gao J，et al. Optimization of Agrobacterium mediated transformation condition in mature embryos of elite wheat[J]. Mol Biol Rep，2009，36： 29.
[12] 尚爱芹，田传卫，赵梁军，等. 根癌农杆菌介导北海道黄杨遗传转化体系的建立[J].园艺学报，2008，35（3）：409.
Genetic transformation of Pinellia ternata with
Agrobacterium tumefaciens-mediated sHSP genes
GUO Zhao-yang， CUI Ting-ting， XUE Jian-ping*， ZHU Yan-fang， ZHANG Ai-min， SHENG Wei， TENG Jing-tong
（Anhui Key Laboratory of Plant Resources and Biology， School of Life science， Huaibei Normal University， Huaibei 235000， China）
[Abstract] Objective： To establish an efficient genetic transformation system of Pinellia ternata. Method： With petioles from test-tube seedlings of P.ternata as explants， Agrobacterium tumefaciens mediation method was adopted to explore the effect of phenolic substances， A. tumefaciens′s concentration， infection time， pre-incubation time and co-cultivation time on genetic transformation efficiency of P. ternata. Result and Conclusion： The genetic transformation efficiency could be effectively enhanced by infecting in A. tumefaciens culture containing AS 40 mg·L-1 for 15 min for three days. The petioles were put into the differentiation medium containing 150 mg·L-1 Kan and 350 mg·L-1 Carb to screening and cultivation. After around 30 days， microtubers could be observed at both sides of the petioles. Gus staining and PCR verification on the regenerated plants showed that the exogenous gene sHSP had been integrated into genome of P. ternata.
[Key words] Pinellia ternate； genetic transformation； sHSP； Agrobacterium tumefaciens mediation
doi：10.4268/cjcmm20122416
[责任编辑 孔晶晶]
推荐访问： 半夏 杆菌 遗传 基因 转化
