CXCR4在乳腺癌组织芯片中的表达及其临床意义

材料与方法

1.1 组织芯片

3套乳腺癌组织芯片购自西安艾丽娜生物科技有限公司，编号分别为BR10010c，BR8011和BC081120a。标本收集于2010年5月—2014年9月，共有正常乳腺组织36例和肿瘤组织204例，其中浸润性导管癌组织150例、导管内原位癌组织50例、小叶原位癌组织4例；其中淋巴结转移的病例69例；年龄27～81岁，平均年龄（47.9±10.5）岁。

1.2 方法

浓缩型羊抗人CXCR4抗体购自Santa Cruz公司。超敏SP（抗羊）试剂盒和DAB显色试剂购自福州迈新公司。组织切片经二甲苯脱蜡、水化后，PBS洗3次各5 min；每张切片加100 μL 3%过氧化氢，孵育10 min，PBS冲洗3次，3 min/次，除去PBS液；滴加正常山羊血清封闭液，室温20 min；每张切片加100 μL的CXCR4抗体（1：200稀释），在4℃下孵育过夜。37℃复温45 min，PBS冲洗3次，3 min/次。滴加羊抗鼠Ⅱ抗100 μl，孵育1 h；PBS洗3次各5 min；DAB显色1～5 min，在显微镜下掌握染色程度；PBS或自来水冲洗10 min；苏木精复染2 min，盐酸酒精分化；自来水冲洗10～15 min；脱水、透明、封片、照相。结果判定：综合染色强度和阳性细胞占总细胞数的百分比进行半定量处理：无染色（-）为0分，染色弱（+）为1分，染色强呈棕黄色（++）为2分，染色很强深棕色（+++）为3分；阳性细胞数10%～50%者为2分，51%～80%者为3分，﹥80%者为4分。上述两项评分相乘：不管其染色强度，阳性细胞数﹤10%为（-），3分为（+），4～5分为（++），6～9分为（+++）。

1.3 统计方法

用SPSS 15.0统计软件分析数据，计数资料采用百分比（%）表6示，采用χ2检验，以P <0.05为差异有统计学意义。

2 结果

CXCR4在正常乳腺组织、导管内原位癌组织、小叶原位癌组织、浸润性导管癌组织（图1）中的阳性表达率分别为8.3%（3/36）、25.0%（1/4）、10.0%（5/50）、72.0%（108/150），4组间阳性表达率的差异有统计学意义（P=0.000）。CXCR4蛋白在不同级别的乳腺癌组织中的阳性率分别为I级18.2%（2/11）、II级80.4%（78/97）、III级以上69.8%（30/43），3组间阳性表达率的差异有统计学意义（P=0.000）；CXCR4蛋白在有转移的肿瘤组织和未发现临床转移证据的乳腺癌组织中的阳性率分别为88.4%（61/69）和11.1%（15/135），两组间阳性表达率的差异有统计学意义（P=0.000）；但CXCR4蛋白的表达在不同年龄（<60岁或≥60）的乳腺癌患者中的差异无统计学意义（P>0.05）。见表1。

3 讨论

SDF-1的趋化作用由CXCR4来介导。CXCR4在正常乳腺组织、乳腺、卵巢、前列腺表达很弱，但在乳腺癌和结肠癌中高表达[5]，同时在乳腺癌中也发现CXCR4表达，并且在转移性乳腺癌细胞株和转移性乳腺癌细胞株中具有高表达[6]。对前列腺癌组织研究发现CXCR4蛋白表达升高与肿瘤的转移正相关[7]。表达CXCR4的肿瘤细胞在SDF-1的作用下从原发部位游走出来后通过血道和淋巴道向远端组织转移并形成转移灶。在前列腺癌、乳腺癌研究发现，CXCR4阳性的肿瘤细胞沿着SDF-1浓度梯度向高浓度迁徙，形成转移灶。因此普遍认为，CXCR4的表达不仅是上皮细胞恶性程度的主要特征之一，也可作为肿瘤转移能力的判断指标[8]。CXCR4与SDF-1结合，可以增加肿瘤细胞黏附能力和侵袭性，并分泌多种血管生成因子[9]。Tamamura等[10]发现SDF-1/CXCR4轴在乳腺癌转移发生中具有明显作用。在体外培养的乳腺癌细胞中加入SDF-1，癌细胞的增殖和侵袭力明显加强，并且转移能力也明显上升；用CXCR4单抗处理后，癌细胞增殖、侵袭、转移能力都受到抑制。

既往曾有几项研究关注CXCR4的表达与乳腺癌转移以及患者预后生存的关系，并指出CXCR4的表达与乳腺癌淋巴结转移密切相关，且SDF-1/CXCR4轴的激活与患者预后成负相关[11-12]。但是，我们注意到这些研究的标本来源比较单一，为一个市级地区患病人群；虽然样本量有上百例，但仍然有数据偏畸可能。因此该研究一改既往从地区医院取材的限制[13]，转而采用西安艾莉娜公司的多张乳腺癌组织芯片进行研究，这些芯片来源于多个地区的多个医疗机构，总样本量达到204例，符合多中心研究的基本要求。该研究发现CXCR4蛋白在不同年龄和性别的乳腺癌组织中的表达差异无统计学意义。但是，CXCR4蛋白在不同病理类型的乳腺癌中存在表达差异：浸润性导管癌组织>导管内原位癌组织>小叶原位癌组织；其中在浸润性导管癌组织中的阳性表达率最高（72%）；在不同级别的乳腺癌组织中CXCR4蛋白的表达也存在差异，在分化程度较低的组织中表达较高，提示CXCR4蛋白的表达可能与乳腺癌组织学分级呈正相关关系。最后，该研究对CXCR4蛋白表达与乳腺癌侵袭转移的关系进行了分析，结果提示在有淋巴结转移的乳腺癌组织中CXCR4的表达比率明显高于无淋巴结转移的乳腺癌组织，其差异有统计学意义。

该研究检测了CXCR4在各类型乳腺癌组织表达差异并分析了CXCR4的表达与病理类型和肿瘤转移之间的关系，为研究CXCR4在肿瘤侵袭与转移中所起作用并为进一步探索乳腺癌侵袭转移机制提供了新的实验依据。

[参考文献]

[1] Zeelenberg IS， Ruuls-Van SL， Roos E. The chemokine receptor CXCR4 is required for outgrowth of colon carcinoma micrometastases[J].Cancer Res，2003，63（13）：3833-3839.

[2] Platt D， Amara S， Mehta T， et al. Violacein inhibits matrix metalloproteinase mediated CXCR4 expression： potential anti-tumor effect in cancer invasion and metastasis[J].Biochem Biophys Res Commun，2014，455（1-2）：107-112.

[3] Douglass S， Meeson AP， Overbeck-Zubrzycka D， et al. Breast cancer metastasis： demonstration that FOXP3 regulates CXCR4 expression and the response to CXCL12[J].J Pathol，2014，234（1）： 74-85.

[4] hang Z， Ni C， Chen W， et al. Expression of CXCR4 and breast cancer prognosis： a systematic review and meta-analysis[J].BMC Cancer，2014（14）：49.

[5] Oliveira FV， Rubie C， Ghadjar P， et al. Changes in CXCL12/CXCR4-chemokine expression during onset of colorectal malignancies[J].Tumour Biol，2011，32（1）：189-196.

[6] Hinton CV， Avraham S， Avraham HK. Role of the CXCR4/CXCL12 signaling axis in breast cancer metastasis to the brain[J].Clin Exp Metastasis，2010，27（2）： 97-105.

[7] Akashi T， Koizumi K， Tsuneyama K， et al. Chemokine receptor CXCR4 expression and prognosis in patients with metastatic prostate cancer[J].Cancer Sci，2008，99（3）：539-542.

[8] Ehtesham M， Stevenson CB， Thompson RC. Preferential expression of chemokine receptor CXCR4 by highly malignant human gliomas and its association with poor patient survival[J].Neurosurgery，2008，63（4）：820.

[9] Wang J， Wang J， Sun Y， et al. Diverse signaling pathways through the SDF-1/CXCR4 chemokine axis in prostate cancer cell lines leads to altered patterns of cytokine secretion and angiogenesis[J].Cell Signal，2005，17（12）： 1578-1592.

[10] Tamamura H， Hori A，Kanzaki N， et al. T140 analogs as CXCR4 antagonists identified as anti-metastatic agents in the treatment of breast cancer[J].FEBS Lett，2003，550（1-3）： 79-83.

[11] 孔令禹，余之刚，薛梅，等.乳腺癌组织SDF-1/CXCR4表达与预后相关性分析[J].中华肿瘤防治杂志，2014（8）： 605-611.

[12] 刘凤磊，赵凤辉，王金穗，等. 乳腺癌CXCL12及其受体CXCR4的表达及意义[J].诊断病理学杂志，2013（6）： 336-339.

[13] 张杨，黄丽，杨齐，等.CXCR4在肺癌组织芯片中的表达及其临床意义[J].中国医药指南，2012，10（36）： 448-450.

（收稿日期：2015-08-27）

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