报告基因融合在一起插入含卵清蛋白启动子（ovalbumin promoter，OV2）和雌激素反应元件（estrogen response element，ERE）的重组质粒pLV-OV2-ERE-EGFP中。现有的多基因共载体构建策略包括mRNA剪切策略[11]、内部启动子策略、融合蛋白策略及蛋白酶策略[12]等。这些策略最主要的不足之处在于载体容纳能力有限[13]。另外，多基因在同一载体上表达时其蛋白活性及表达效率不及单基因表达载体[14]。2A肽的多基因载体构建策略避免了多基因表达时蛋白活性不高或下游基因表达量低等缺点[15]。Adam等用人角蛋白K14基因的启动子替换PGK的启动子（LVK14），后用慢病毒载体感染猪胚胎。尽管在猪所有组织中都检测到了LVK14的整合体，但是仅在皮肤中有GFP的表达[16]。本试验转染鸡输卵管上皮细胞和鸡胚成纤维细胞24 h后，前者出现绿色荧光，而后者几乎没有。说明启动子在不同种类的细胞选择性地执行功能，或是EGFP在不同细胞中差异性地将解，可用Western Blot进行验证。纳豆激酶在鸡输卵管上皮细胞中转录的mRNA量较低，表明重组质粒中OV2的效率较低。杨鹏翔等以EGFP和萤火虫荧光素酶为报告基因，构建OV2慢病毒表达载体，转染鸡输卵管上皮细胞、鸡胚成纤维细胞、鼠3T3-L1 前脂肪细胞和牛乳腺上皮细胞，通过荧光和酶活性检测发现基于OV2调控序列构建的表达载体无法实现外源基因的高效特异性表达[17]。Ochiai等采用OV2的5′侧翼1.35 kb片段和3种不同的病毒启动子分别构建载体，通过基因枪的方法注射到产蛋母鸡的输卵管部位，结果发现病毒启动子的启动效率远远高于OV2调控区[18]。这些都与本研究结果一致，验证OV2在鸡输卵管上皮细胞表达效率低。
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