计划为12个周,实验刚开始和最后一天早上7:00集中采集了所有参与测试运动员安静时的静脉血5ml,然后立即注入肝素抗凝管3毫升后,待摇匀待测T淋巴细胞亚型;其余2毫升静脉血和模拟2000m赛艇专项比赛后即刻采集的2ml静脉血液注入离心管内,常温并静置30分钟后,于2500rpm离心10min,取其上清液部分,将其保存在小试管中储藏于-20℃冰箱内冻存,备用测IgA、IgG、IgM。服用黄芪组的所有队员在上和下午训练后的30分钟后饮用25克的黄芪水煎剂250毫升;对照组的运动员只饮用等量矿泉水。全程观察记录参加实验的所有的队员在这12周内患上呼道感染的人次信息。
2.2.2 T淋巴细胞亚群测定
我们采用了双色免疫荧光法。所用仪器是采用美国BD(BECT0N DICKINSON)公司生产的流式细胞仪(型号FACSCalibur)。实验操作时取50μl抗凝全血置于一个干净的试管,加入3μl鼠抗人CD4+、CD8+单克隆抗体(CD4+抗体为R-PE荧光素的标记,CD8+抗体为FITC荧光素的标记),轻轻混匀并标为待测管;另外取50μl的抗凝全血置于另一干净的试管,加入3μl的鼠抗人CD4+、CD8+单克隆阴性抗体,轻轻的混匀标为标准管。两个试管室温避光孵育15min后,及时加溶血素100μl并轻轻混匀,破坏红细胞。加入双蒸水1ml,保值室温并避光5min,离心(1200rpm)5min,弃上清液,并去除红细胞的碎片。再离心(1200rpm)5min,再弃上清液,加0.5ml PBS的溶液待测。采用Cell Quest软件上机检测并统计实验结果。
2.2.3 IgA、IgG、IgM测定的方法
IgA、IgG、IgM采用的是单向放射状免疫扩散法,本实验应用上海捷门生物技术合作公司的成品彩色IgG.A.M单扩散板。提取取待测的血清0.1ml,然后再添加入生理盐水0.3ml混匀,测IgG 5μl,测IgA 10μl,测IgM 15μl,分别注入G.A.M板孔内,并将扩散板放在湿盒内,放置于水平湿盒于37。C的培养箱内,24小时后观察其结果,采用免疫测量仪测出每个孔扩散后的直径,从IgG.A.M含量表中认真查出相应的含量。
2.2.4 数据处理
我们采用的SPSS软件包进行实验数据统计,各项测定结果以±s表示,各组内前后比较用配对样本t检验,组间比较分析用单因素方差来分析,以p<0.05为显著性差异水平。
3 实验结果与分析
3.1 大负荷训练期赛艇运动员上呼吸道感染率的情况
本研究显示,12周的大负荷运动量训练期间对照组运动员的感染疾病率明显高于补充黄芪组。本次对参加训练的20名运动员进行调查,其中患感染性疾病黄芪组10名患上呼吸道感染2人患病率为总人数的20%,对照组10名患上呼吸道感染7人患病率为总人数的70%,黄芪组运动员们患上呼吸道感染人数明显要少于对照组(p <0.05),他们平均痊愈时间也较对照组少2.5天。这表明12周黄芪水煎剂服用可明显降低运动员感染疾病的发生率。服用谷氨酰胺降低感染率可能原因之一,是12周黄芪补充能促进了B细胞增殖、分化和浆细胞抗体生成, 从而提高机体的免疫力。
3.2 黄芪补充期间赛艇运动员体液免疫的变化
本研究结果表明(表2),说明黄芪水煎剂阻止了运动员大负荷运动训练引起的免疫机能的下降,考虑其原因可能为其能促进B细胞增殖、分化和浆细胞抗体生成, 从而提高机体的免疫力。3.3 黄芪补充期间赛艇运动员细胞免疫的变化
本研究结果(表3、4)显示,12周大负荷训练组CD3+显著下降(p<0.05),CD4+显著下降,CD8+无明显变化,CD4+/CD8+比值下降(p<0.05),此研究结果与前人基本相同。而黄芪补充组实验后CD3+无显著性变化,,CD8+显著下降(p<0.05),CD4+/CD8+升高(p<0.05);实验前安静时两组队员CD4+/CD8+比值都在正常值以下,表明前几阶段不但影响了机体体液免疫,而且对细胞免疫也有影响,且此时黄芪组免疫抑制程度相对更严重。实验后对照组和实验组CD4+/CD8+值有显著性差异,进一步表明对照组运动员的免疫功能显著下降,黄芪组运动员的免疫抑制有了明显恢复。如果补充黄芪,则可对人体细胞的免疫有正性调节作用。
黄芪改善细胞免疫机能的可能机理一方面是黄芪补充后使体内的辅助细胞和抑制细胞比值增高,T抑制细胞水平下降。另一方面我们的黄芪补充又能够增加体内CD3+淋巴细胞数量,提高CD4+/CD8+比值,黄芪多糖还能够促进细胞表面黏附分子的表达,从而使得人体淋巴细胞与内皮细胞黏附,增进人体淋巴细胞的再循环等。
4 结论
综上所述,黄芪水煎剂补充可以抑制大负荷训练期赛艇运动员的体液免疫和细胞免疫机能的下降,可以降低感染性疾病的发病率。
[参考文献]
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[3]施建蓉.中医药组方抗运动性疲劳的研究与展望.中国运动医学杂志[J].1999(4).
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