[摘要] 目的:研究人参瓜蒌莪术汤(RGE)对Lewis肺癌模型小鼠的治疗作用及机制。方法:建立小鼠Lewis肺癌移植瘤模型,分为模型对照组(NS组),环磷酰胺对照组(CP组),RGE高、中、低剂量组。在计算抑瘤率的基础上,运用PCR-ELISA法检测瘤组织端粒酶活性。结果:RGE低、中、高剂量组均能明显降低小鼠Lewis肺癌瘤重(P<0.01),中剂量组抑瘤率达47.88%;RGE低、中、高剂量组均能明显降低瘤组织细胞端粒酶的活性(P<0.01),中剂量组对端粒酶活性的抑制作用显著强于CP组(P<0.01)。结论:RGE具有抑制小鼠Lewis肺癌生长的作用,其作用机制可能与降低肿瘤组织端粒酶活性有关。
[关键词] 人参瓜蒌莪术汤;肺癌;端粒酶
[中图分类号] R734.2[文献标识码]A [文章编号]1673-7210(2009)07(c)-012-02
Effect of Renshengualouezhu Decoction on telomerase activity of Lewis lung cancer in mice
NI Ya, QIU Xingfan
(Hubei University of Chinese Medicine, Wuhan 430060, China)
[Abstract] Objective: To explore the influence of treatment and mechanism of Renshengualouezhu Decoction (RGE) on Lewis lung cancer in mice. Methods: Mice Lewis lung cancer models were established, and divided into 5 groups: model control group (NS group), low-dose RGE group, middle-dose RGE group, high-dose RGE group and Cyclophosphamide group(CP group). Then calculated the inhibition rate and used PCR-ELISA to detect the activity of telomerase. Results: The tumor weight of low-dose RGE group, middle-dose RGE group, high-dose RGE group and CP group were significantly decreased (P<0.01). Inhibition rate in the middle-dose RGE group reached 47.88%. RGE could reduce the telomerase activity on all dose levels of low, middle or high (P<0.01). The middle-dose RGE group was significantly better than the CP group (P<0.01). Conclusion: RGE can significantly inhibit the growth of mice Lewis lung cancer. It may be related to its ability to reduce telomerase activity.
[Key words] Renshengualouezhu Decoction; Lung cancer; Telomerase
肺癌是严重危害人类健康的恶性肿瘤之一,也是全世界目前发病率和死亡率最高的癌症。中医药疗法治疗肺癌在稳定病灶、延长生存时间、改善生存质量、减轻放、化疗的毒副作用和增强放、化疗的效果等方面显示出独特的疗效与作用优势[1-3]。人参瓜蒌莪术汤(RGE)是全国知名老中医邱幸凡教授40年临床治疗肺癌的经验方,也是其“补肺通络解毒法”治疗肺癌的代表方剂,主要具有补肺、通络、解毒、消瘤的功效,临床疗效显著。本实验选用小鼠Lewis肺癌模型,在观察RGE抑瘤率的基础上,运用PCR-ELISA法检测肿瘤组织端粒酶活性,初步探讨该复方的作用效果与机制,为其临床应用提供实验依据。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 实验动物及瘤株健康C57BL/6J小鼠50只,雌性,鼠龄6～8周,体重(20±2) g,由江苏省实验动物中心提供;Lewis肺癌细胞株(Lewis lung cancer,3LL),由南京市凯基生物制品有限公司提供。
1.1.2主要仪器与器材超净工作台(7278825型,苏州净化设备有限公司),分析天平(BS110S型,美国SARTORIUS公司),自动酶标仪(WD-2102A型,北京市六一仪器厂)。
1.1.3主要试剂小鼠端粒酶ELISA 试剂盒(德国Boehringer Mannheim公司),环磷酰胺(CP,上海制药厂)。
1.2 实验方法
1.2.1 动物模型的建立[4-5]复苏Lewis肺癌瘤株,接种于3只C57BL/6 J小鼠右腋窝皮下以保种,每10天转种1次,连续2次。正式实验时,选取生长良好的Lewis肺癌组织,剪碎,匀浆,按照肿瘤重量(g)与生理盐水(ml)1∶3匀浆制成细胞悬液,经0.2%台盼蓝染色后计数活细胞数>95%,调整细胞浓度为1×106个/ml,取健康C57BL/6J小鼠50只,每只小鼠右腋皮下接种0.2 ml细胞悬液。
1.2.2受试药物的制备RGE由黄芪30 g、人参10 g、全瓜蒌20 g、莪术30 g、蜈蚣6 g、龙葵30 g组成,购于湖北省中医院,经鉴定合格。按常规方法制成2 g/ml,4℃保存备用。
1.2.3 分组及用药将50只小鼠随机分为5组,每组10只,分别为模型对照组(NS组),环磷酰胺对照组(CP组),人参瓜蒌莪术汤高剂量组(RGEH组)、中剂量组(RGEM组)、低剂量组(RGEL组),小鼠依法造模。接种次日起,模型对照组每天以生理盐水灌胃,0.4 ml/只。环磷酰胺对照组按照60 mg/(kg·d)的给药量(容量为0.2 ml/10 g体重),灌饲环磷酰胺。RGE低、中、高剂量组分别按照15 g/(kg·d)、30 g/(kg·d)、60 g/(kg·d)的给药量(容量为0.2 ml/10 g体重),灌饲RGE汤。连续20 d,第21天脱颈处死动物,采取标本。
1.2.4 抑瘤率取瘤组织称重,并计算抑瘤率。抑瘤率=[1-(实验组的平均瘤重/空白组的平均瘤重)]×100%。
1.2.5 PCR-ELISA法检测瘤组织端粒酶活性实验步骤按照试剂盒说明书进行,包括瘤组织中提取物的制备、考马斯亮蓝法检测样本蛋白浓度、端粒酶重复序列扩增(TRAP反应)、杂交及ELISA反应,使用酶标仪测定加入终止液后30 min内标本450 nm吸收值。
1.3 统计学处理
所有检测结果以均数±标准差(x±s)表示,采用SPSS 15.0统计软件包进行单因素方差分析,P<0.05表示有显著性差异。
2 结果
2.1 RGE对小鼠Lewis肺癌瘤重及抑制率的影响
RGE低、中、高剂量组及环磷酰胺组瘤重与空白对照组相比,均明显降低(P<0.01)。中剂量组抑瘤率可达47.88%。在不同浓度组间比较,中剂量组的抑制作用显著强于低剂量组(P<0.01),但随药物浓度的进一步增加,抑制作用反而显著下降(P<0.01)。见表1。
表1 RGE对瘤重及抑制率的影响(x±s)
与NS组比较,※※P<0.01
2.2 RGE对小鼠Lewis肺癌组织细胞端粒酶活性的影响
见表2。
表2 RGE对小鼠Lewis肺癌组织细胞端粒酶活性的影响(x±s)
与NS组比较,※※P<0.01;与CP组比较,★★P<0.01
RGE汤低、中、高剂量组均能明显降低瘤组织细胞端粒酶的活性(P<0.01)。中剂量组对端粒酶活性的抑制作用显著强于CP组(P<0.01)。中剂量组的抑制作用显著强于低剂量组(P<0.01),但随药物浓度的进一步增加,抑制作用并没有增强,反而明显下降(P<0.01)。
3 讨论
端粒酶是近年来肿瘤学领域的研究热点之一。端粒酶的过度活化可使染色体端粒长度处于一种动态平衡,细胞获得无限增殖的能力,即永生化,而导致肿瘤的发生[6-7]。许多研究表明端粒酶存在于85%～90%的肿瘤细胞中,几乎所有人肺癌细胞株及大多数肺癌组织中均有端粒酶的表达,而在正常的体细胞中则很少表达[8-9],端粒酶与恶性肿瘤之间有较高的相关性[10-11],端粒酶的激活可能是肿瘤形成和发展的共同途径,而端粒酶的抑制则可使表达此酶的恶性细胞恢复必死性,从而达到抗瘤的效果[12]。
本实验选用了国际公认的肺癌实验动物模型——小鼠Lewis肺癌移植瘤模型作为体内实验对象,该模型具有实验结果精确度高、易于重复的优点,在实验条件可控制的情况下,可以同一时间“制造”出一定数量、比较接近的带瘤动物,适宜于进行抗肿瘤药物筛选。而中医药学以整体思想体系为基础,重视宏观调控,中药复方具有多成分、多靶点的特点,体内实验也更能较全面地反映药物的作用。PCR-ELISA法是一种PCR定量方法,该方法通过在PCR扩增以后,在微孔板上借用酶联免疫吸附试验(ELISA)的原理,使用酶标抗体,进行固相杂交来实现定量,具有灵敏度高、特异性强、简便易行的特点,现已广泛应用于恶性肿瘤的端粒酶活性研究。
RGE是依据中医络病理论,针对肺癌“脏虚络痹毒结”的病机,以补肺益气、祛痰化瘀、清热解毒、通络消瘤为基本大法,由黄芪、人参、全瓜蒌、莪术、蜈蚣、龙葵等组成的中药复方,经过长期的临床观察,该方对控制肺癌患者病灶、延长生存期具有良好的疗效。本实验初步证实,RGE对小鼠Lewis肺癌具有明显的抑制作用,能显著降低肺癌组织端粒酶的活性,提示RGE治疗肺癌有很好的临床应用前景,而抑制肿瘤细胞端粒酶活性可能是其抗肿瘤作用的机制之一。
[参考文献]
[1]王东建.肺癌的中西医结合治疗进展[J].中国肿瘤,2008,17(2):105-107.
[2]许彬.肺癌的中医药治疗进展[J].吉林中医药,2008,28(5):385-387.
[3]梁素娇.中草药治疗肺癌并发症分析[J].实用医技杂志,2009,16(1):70.
[4]郑亚兵,马胜林,周卫民.参附注射液抗Lewis肺癌小鼠癌性恶液质的实验研究[J].中华中医药杂志,2009,24(3):380-382.
[5]梁靓靓,殷东风,周立江.小柴胡汤对小鼠Lewis肺癌作用的病理形态学观察[J].实用肿瘤学杂志,2009,23(1):14-15.
[6]Dejmek A, Yahata N, Ohyashiki K, et al. Correlation between morphology and telomerase activity in cells from exfoliatire lung egtologlc specimens [J]. Cancer,2000,90(2):117-125.
[7]马永红,党荣理,任立松.端粒酶的研究进展[J].生物技术通报,2008,1:75-78.
[8]黄小琪,林英辉.端粒酶活性检测与非小细胞肺癌相关性研究[J].临床与实验医学杂志,2007,6(4):43-45.
[9]胡坚,屠政良,孙鹂,等.端粒酶活性在非小细胞肺癌不同组织细胞中表达的研究[J].浙江医学,2003,25(10):583-584,587.
[10]Albanell J, Lonardo F, Rusch Y, et al. High telomerase activity in primary lung cancer: association with increased cell proliferation rates and advanced pathologic stage [J]. J Natl Cancer Inst,1997,89(21):1609-1615.
[11]陈鹏,于泽成.幽门螺杆菌感染、端粒酶表达与胃癌相关性分析[J].中国医药导报,2009,6(3):27-28.
[12]Perry PJ, Jenkins TC. Recent advances in the development of telomerase inhibitors for the treatment of cancer [J]. Expert Opin Investig Drugs,1999,8(12):1981-2008.
(收稿日期:2009-04-29)
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